乳制品中蛋白质检测方案(定氮仪)

智能文字提取功能测试中

维普资讯 http：//www.cqvip.com1949福建分析测试2004，13(2) 采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质 王丹红1，周黎榕1，傅弘毅2，朱曙梅 (1.福建出人境检验检疫局，福建，福州 350001；2.马尾出人境检验检疫局，福建，福州 350014) 摘 要 采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质含量，对于食品中蛋白质含量3%~80%范围均能获得良好的结果。与经典凯氏法比较，测定结果令人满意，且该方法快速、准确。 关键词 模块式消化；全自动凯氏定氮仪；蛋白质 Determination of protein in foodstuffs by using block digestion andkjeltec auto analyzer Wang Danhong， Zhou Lirong， Fu Hongyi， Zhu Shumei (Fujian Entry-esit Inspection and Quarantine of P. R. C.， Fuzhou， Fujian， 350001) Abstract Using block digestion and kjeltec auto analyzer determine the protein content of foodstuffs， excellentresults are obtained with the protein content range from 3% to 80%. Comparing this method with the traditionalkjeldahl method， the result is satisfactory， this method is quick and accurate. Key words Block digest； Kjeltec auto analyzer； Protein 蛋白质为复杂的含氮有机化合物，是各种氨基酸以肽键连接而成，各类食品的蛋白质含量很不均匀，蛋白质含量是评价食物营养价值的重要指标之一。在食品中蛋白质含量测定方法中最常用最基本的方法是凯氏定氮法，在GB/T 5009.5-20032中也将其定为法定检测方法，凯氏定氮法有常量凯氏氮法和微量凯氏定氮法。采用经典的凯氏定氮法比较费时费力，采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质，该方法比经典法快速，且数据准确可靠。 材料与方法 1.1 仪器与试剂 1.1.1 主要仪器：2300型全自动凯氏定氮仪(瑞典FOSS TECATOR 公司生产)， DS-20消化炉及排废装置，样品磨，电子天平(准确至0.0001克)。 1.1.2 主要试剂：浓硫酸；硫酸钾；硫酸铜；盐酸标准溶液0.1027 mol/mL；氢氧化钠溶液400 g/L；1%溴甲酚绿和0.7%甲基红混合指示剂；1%硼酸吸收溶液；硫酸铵；蔗糖。所用试剂均为优质品。 1.2 测定方法 称取适量样品放入消化管中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及约 12 mL 浓硫酸慢慢摇动将样品浸湿。把消化管放入已预热至42℃的加热模块中，将抽气泵打开到最大。5min 后，关小抽气泵至酸雾刚好充满排废罩，在试管中形成冷凝环。约60 min样品消化至透明蓝绿色液体，取出冷却至室温。将消化管放入2300型自动凯氏定氮仪蒸馏，关上安全门，待仪器自动蒸馏、滴定、计算并打印结果。 2 结果与讨论 2.1 精密度 取3种蛋白质含量不同的样品，每种样品平行测定6次，从测定结果可见，用该仪器的精密度良好(见表1)。 2.2 准确度 做数次氮回收率测定，检验操作过程和设备的准确性。 2.2.1 氮的损损：用0.12硫酸铵和0.67g蔗糖的取样量，按样品准备步骤加入所有其他试剂，和样品分析一样的方法消化和蒸馏。结果见表2，从表中可知平均回收率达99.5%。 ( 作者简介：王丹红(1969一)，女，工程师，分析化学理学士，主要从事饲料和食品方面的检验。 ) 表1 仪器精密度测定 样品名称 蛋白质含量 平均值 相对标准差 (g/100g) (g/100g) (RSD%) 纯牛奶 3.18 3.17 3.20 3.18 0.34 3.19 3.18 3.18 大豆 31.2531.4631.38 31.44 0.41 31.53 31.6231.39 螺旋藻粉 67.5467.7867.58 67.68 0.16 67.6467.6967.82 表2 氮的回收率 次数 硫酸铵量理论上氮含量实际所测得氮含量回收率 (g) (%) (%) (%) 0.1206 21.21 21.10 99.48 2 0.1213 21.21 21.15 99.72 3 0.1223 21.21 21.09 99.43 4 0.1211 21.21 21.08 99.39 5 0.1228 21.21 21.11 99.53 2.2.2 蒸馏和滴定效率：采用0.12硫酸铵和0.67g蔗糖的取样量，省略消化步骤，用2300型自动定氮仪测定其氮含量，测定5次，平均回收率大家100.4%。 2.2.3 消化效率：用0.1g盐酸赖氨酸和0.67g蔗糖的取样量，按样品准备步骤加入所有其他试剂，和样品分析一样的方法消化和蒸馏。结果见表3，表中可知回收率达99%。 表3 消化效率 次数 盐酸氨酸量理论上氮含量 实际所测得 回收率 (g) (%) 氮含量(%) (%) 0.1042 15.34 15.20 99.09 2 0.1049 15.34 15.21 99.15 3 0.1007 15.34 15.24 99.35 4 0.1024 15.34 15.19 99.02 5 0.1034 15.34 15.22 99.22 从这3个回收率可知，模块式消化、2300型全自动凯氏定氮仪有较高的准确度。 2.3 仪器法与经典法比较 2.3.1 两种消化系统的比较：从表3可以看出，对于同一样品和称样量，模块式消化系统比传统消化系统，每个样品蒸发而损失的酸从14.4 mL 降低 2.4mL(按一样品两个重复计算，下同)。酸用量减少一半，消化时间大大地缩短。且采用模块式消化系统 DS20一次性可比消化20个样品，大大提高工作效率。 表4 两种消化系统的比较 项目 传统消化系统 模块式消化系统 需用的酸总量(mL) 30.0 10 蒸发损失的酸(mL) 7.2 1.2 消煮时间 2~3小时 45~60分钟 加热 无控温单个加热带控温模块式消化炉 2.3.2 两种方法测定结果比较：分别用两种方法测定螺旋藻、姬松茸、纯牛奶、皮蛋和盐渍鱼籽的蛋白质，结果见表5(表中结果均为两次测定的平均值)。从表中可见，测定结果的误差均在允许范围内。 表5 两种方法测定食品蛋白质结果的比较 样品 经典法 仪器法 测定结 相对偏差 (%) (%) 果差值 (%) 螺旋藻粉 71.25 71.69 0.44 0.31 姬松茸 32.58 32.26 0.32 0.49 纯牛奶 3.23 3.31 0.08 1.22 皮蛋 13.12 13.36 0.24 0.91 盐渍鱼籽 25.78 26.01 0.23 0.44 3 结 论 采用模块式消化系统大大地缩短消化时间，节约酸的用量，操作简便；用自动定氮仪测定食品中蛋白质与经典法比较，结果令人满意，且大大提高了分析速度。 4 注意事项 (1)消化时应注意，样品消化液必须含有过量的硫酸，以防止氨的损失。 (2)消化时间要掌握好，时间过长会引起氨的损失；消化时间不够，消化不完全也会导致总氮量偏低。 (3)对于高脂肪的物质(脂肪>10%)，所需酸的量要多2~3毫升，消化时间也相应长一些；或加入酸后，隔夜再再化。如果冒泡(下转第1965页) 验结果，供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显相同的紫棕色斑点。该法斑点清晰度好，R：值适中，重复性好，故建议将一清颗粒中黄芩薄层色谱鉴别的展开剂改为醋酸乙酯一丙酮-甲酸一水(26：7：1.5：3)图谱见图1。 图1 一清颗粒黄芩薄层色谱示意图 1、2、3为供试品；4为黄芩苷对照品；5为阴性对照 薄层色谱法是黄酮类成分中药制剂最常用的定性分析方法。。-一般采用吸附薄层色谱，常用的吸附剂有硅胶与聚酰胺。聚酰胺薄层色谱适用范围广，特别适合于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类，黄芩苷正是含有游离酚羟基的黄酮苷类，但由于聚酰胺薄层色谱板铺制比较麻烦，成本也比硅胶薄层色谱板高，所以一般都采用硅胶薄层色鉴定黄酮化合物，但采用硅胶薄层分离时，除对黄酮类成分产生吸附外，还与游离酚羟基极性较大的黄酮化合物形成氢 (上接第1950页) 成问题，可以缓慢地加入3 mL 30~35%过氧化氢来减少冒泡，待过氧化氢反应后才能进行下一步操作3 (4)硫酸钾与硫酸用量的比值是消化成功的关键，它决定酸的沸点，也决定消化所需的时间。但比值不宜过大，一般比值为1：2。比值过大，沸点太高，生成的硫酸氢铵就分解放出氨，使氮损失。 键从而产生拖尾现象。解决硅胶薄层鉴别黄酮类所存在问题，通常采用氢氧化钠制备的硅胶G板，可以有效地减少黄酮类成分在硅胶薄层色谱板上的拖尾现象；进行二次展开，可有效地增大极性黄酮类成分在硅胶G板上的分离；三氯化铁显色后检视荧光，能有效地增大其检测的是灵敏度。这仅解决黄酮类化合物薄层谱鉴别部分问题。我们通过对黄芩药材的硅胶薄层的条件实验研究发现，分离黄酮类化合物不管采用哪种吸附剂，实验成败关键是展开剂及其配比的选择，对于分离鉴别黄酮苷元常用的展开剂是甲苯一甲酸乙酯一甲酸(5：4：1)，并可以根据成分极性大小适当地调整甲苯与甲酸的比例即可取得满意实验结果，分离黄酮苷类要用极性展开剂，常用的展开剂是醋酸乙酯一丁酮一甲酸-水(10：6：1：1)，我们将丁酮换成丙酮，并适当调整了醋酸乙酯和甲酸比例，将展开剂改为醋酯乙酯一丙酮一甲酸一水(26：7：1.5：3)，一清颗粒中黄芩苷分离鉴别取得非常圆满实验结果，为一清颗粒中的黄芩苷薄层色谱鉴别法的改进提供一定理论依据。 ( 参 考 文 献 ) ( [1]中国药典(2000年版)一部.北京：化学工业出版社， 2000.321. ) ( [2]吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别.北京：人民卫生出版社，1997. 4 5 6. ) ( [3]丘晨波.中药浸提制剂技术和质量监控.北京：中国医 药科技出版社，1995.127. ) ( 参 考 文 献 ) ( [1]于雯，吕玉琼.全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质.中 国卫生检验杂志，2001， 11(5)：610. ) ( [2]国家标准GB/T 5009.5-2003食品中蛋白质的测定.北 京：中国标准出版社. ) ( [3]杨震.食品中蛋白质测定应注意的问题.营养与食品卫 生，1996，12( 2 )：10-11. ) 采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质含量．对于食品中蛋白质含量3％～8O％范围均能获得良好的结果。与经典凯氏法比较，测定结果令人满意，且该方法快速、准确。