玉米中玉米赤霉烯酮检测方案(液相色谱仪)

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赛智科技(杭州)有限公司 应用方案 赛智科技(杭州)有限公司玉米赤霉烯酮的高效液相色谱 HPLC检测方案 【玉米赤霉烯酮】 玉米赤霉烯酮是一种酚的二羟基苯酸的内酯结构，分子式为 C18H22050它不溶于水、二硫化碳和四氧化碳，溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯和酸类，微溶于石油醚。由于玉米赤霉烯酮是一种内酯的结构，因此在碱性环境的条件下可以将酯酯打开，当碱的浓度下降时可将键恢复。玉米赤霉烯酮又称 F-2毒素，玉米烯酮。它首先从有赤霉病的玉米中分离得到。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物，其中玉米的阳性检出率为45%，最高含毒量可达到2909mg/kg；小麦的检出率为20%，含毒量为 0.364~11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，110℃下处理 1h才被完全破坏。 【作用】 玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。许多农作物如小麦、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯烯有许多种衍生物，例如7一脱氢玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸、8一羟基玉米赤霉烯酮。同时，植物中的玉米赤霉烯酮结构和对生物体的影响与霉菌产生的玉米赤霉烯酮作用是一致的，这也为我们预防玉米赤霉烯酮中毒提供了一条途径。玉米赤霉烯酮是--种特殊毒性的生物毒素，具有类雌激素样作用，能引起动物流产、死胎、返情等生殖机能异常，还可以导致生长下降、免疫抑制、不育、畸形等。国内外学者做了大量的研究，来揭示玉米赤霉烯酮损害机体的机制。它主要通过影响机体的生殖性能，引起细胞凋亡、致畸、损伤 DNA、氧化损害、影响免疫机能等机制，来影响动动与人类的健康。 【样品处理过程】 标准储备液(0.1mg/ml)：准确称取一定量标准品，用甲醇+乙腈(1+1)溶解，配成0.1mg/ml的标准液。标准工作液：根据使用需要准确吸取一定量的玉米赤霉烯酮储备液，用流动相稀释，分别配成相当于 10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml 的标准工作液。用0.45um 的有机系滤膜过滤，精密量取 20pL， 注入液相色谱仪，记录色谱图。 样品处理：将样品研磨，硬质的粮食用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛，不要磨成粉末，称取50g(精确到0.01g)磨碎的试样与100mL 容量瓶中，加入 5gNaCl，用提取液(乙腈+水(9+1))定容至刻度，混匀，转移至均质杯中高速搅拌提取 2min， 定量滤纸过滤，移取 10mL 滤液液 50mL容量瓶中加水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液于干净的容器中。 净化、洗脱：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取滤液10mL 注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约1滴/s的流速通过，直至空气进入亲和柱中，依次用10mLPBS 清洗缓冲液和10mL 水淋洗免疫亲和柱，流速约为1滴/s-2滴/s直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液抽干小柱，加入1mL甲醇洗脱，再用甲醇定容至 1mL。 【色谱条件】 色谱柱：C18反相色谱柱，4.6 mm*250mm， 粒度 5 um 流动相：甲醇：水：乙腈=8：46：46 波长：：入 ex274nm 入em440nm 流速： 1.0mL/min 进样样： 20pL 柱温：30℃ 赛智科技(杭州)有限公司 E-mail：：surwit@hplc.com.cn 浙江省杭州市东冠路611号金盛科技技3号楼5-6楼 Tel： 0571-86631750 Fax： 0571-86631735 应用方案 【谱图】 【仪器配置】 高压输液泵 0.001-9.999ml/min 1台 荧光检测器 1台 手动进样阀 含触发开关 1套 阀安装支架 1套 液相色谱柱 C18反相色谱主 1支 微量进样器 100ul 1支 维护工具包 液相色谱专用启动工具 1套 色谱工作站 N2000 或 Clarify 1套 超声清洗仪 1套 真空抽滤装置 带真空泵 1套 分析天平 感量 0.1mg 1台 Fax： 0571-86631735 网址： www.surwit.com www.hplc.com.cn 赛智科技(杭州)有限公司E-mail：：surwit@hplc.com.cn浙江省杭州市东冠路金盛科技技号楼-楼Tel： 址： www.surwit.com www.hplc.com.cn 【样品处理过程】    标准储备液（0.1mg/ml）:准确称取一定量标准品，用甲醇+乙腈（1+1）溶解，配成0.1mg/ml的标准液。标准工作液：根据使用需要准确吸取一定量的玉米赤霉烯酮储备液，用流动相稀释，分别配成相当于10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的标准工作液。用0.45µm的有机系滤膜过滤，精密量取20µL，注入液相色谱仪，记录色谱图。    样品处理：将样品研磨，硬质的粮食用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛，不要磨成粉末，称取50g（精确到0.01g）磨碎的试样与100mL容量瓶中，加入5gNaCl,用提取液(乙腈+水（9+1）)定容至刻度，混匀，转移至均质杯中高速搅拌提取2min，定量滤纸过滤，移取10mL滤液于50mL容量瓶中加水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液于干净的容器中。       净化、洗脱：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取滤液10mL注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约1滴/s的流速通过，直至空气进入亲和柱中，依次用10mLPBS清洗缓冲液和10mL水淋洗免疫亲和柱，流速约为1滴/s-2滴/s直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液抽干小柱，加入1mL甲醇洗脱，再用甲醇定容至1mL。 【色谱条件】色谱柱： C18反相色谱柱, 4.6 mm*250 mm，粒度5 µm流动相:甲醇：水：乙腈=8:46:46波长：λex274nm   λem440nm流速：1.0mL/min进样量：20µL柱温：30℃