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单克隆抗体中分子量检测方案(场流分离仪)

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非对称场流分离系统（Eclipse AF4）是一种比较完善的方法，可测定蛋白质制剂中不同种类聚集物的尺寸和定量测定。AF4的一个最主要优点是使用蛋白质的特定缓冲液作为流动相。其分离不受缓冲液离子强度的影响。

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技术文章WYATTTECHNOLOGY公司网址：www.wyatt.com.cnwww.wyatt.com美国怀雅特技术公司且能够更加深入了解其物理，化学性质。非对称场流分离系统(AF4)是一种比较完善的方法，可测定蛋白质制剂中不同种类聚集物的尺寸和定量测定。AF4 的一个最主要优点是使用蛋白质的特定缓冲液作为流动相。其分离不受缓冲液离子强度的影响。本研究考察了 AF4 作为制备工具，去分离聚集物，片段以及单体的能力。系统包含了 Eclipse(怀雅特技术公司欧洲分公司， Dernbach，德国)，配备了 DAWN 多角度光散射仪(MALS)，示差折光仪(RI)，紫外检测器(UV)以及一个组分收集器。分离的实现借助于半制备型350um厚的 SP 通道。一个单克隆抗体样品被光线照射，导致碎片以及聚集的产生。使用Gilson FC-203B馏分收集器，1mg蛋白质每次运行被注入到通道，且分离后被收集到玻璃制的管路中。收集到的片段溶液被浓缩，，且最终浓度使用UV检测器在280nm 下测定或使用 Micro-BCA Assay 测定。图1紫外在280nm 下的相应以及 MALS 检测到的光照射的MAb1 以及天然 MAb1 的结果。 Peak Number Molecular Weight Protein Species Peak 1 37 kDa Fragments Peak 2 166 kDa Monomer Shoulder 295 kDa Dimer Peak 3 2770kDa Oligomer 图2检测到的不同种类的 MAb1 的分子量。 AF4 是分析及制备分离蛋白质聚集体本-个很有效的方法，因为它的分离可以在任何一种缓冲液或是纯水中进行，有利于保持样品活性。此外，由蛋白聚集可能引发的免疫反应与单体蛋白进行的比较研究究可通过 AF4 进行，目前对它感兴趣的主要是管理机构和整个的制药行业。非对称场流分离系统（Eclipse AF4）是一种比较完善的方法，可测定蛋白质制剂中不同种类聚集物的尺寸和定量测定。AF4的一个最主要优点是使用蛋白质的特定缓冲液作为流动相。其分离不受缓冲液离子强度的影响。

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