乳及乳制品中三聚氰胺检测方案(液相色谱仪)

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高效液相色谱法测定乳及乳制品中的三聚氰胺 唐亮* (北京北分瑞利分析仪器集团有限责任公司色谱中心，北京，100095) 摘要：：参照国标及各地方标准，采用高效液相色谱法对乳及乳制品中的三聚氰胺进行测定，并对各实验条件进行了优化。实验表明：样品分离效果好，检测结果准确可靠，方法灵敏度高，操作简便。 关键词：高效液相色谱，乳制品，三聚氰胺 1.原理 试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液，经高效液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。 2. 仪器 2.1 SY-8100 高效液相色谱，配紫外检测器(北京北分瑞利分析仪器集团有限责任公司)。 2.2天平：感量0.01 g. 2.3分析天平：感量0.0001 g. 2.4高速离心机：转速>4 000 r/min。 2.5超声波清洗器。 2.6旋涡混匀器。 3. 试剂 所有试剂，除另有说明外，均为分析纯试剂，水为GB/T6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。 3.1磺基水杨酸。 3.2柠檬酸。 3.3辛烷磺酸钠l：：高效液相色谱离子对试剂。 3.4乙腈：色谱纯。 3.5盐酸。 ( ”作者简介：唐亮，男，198 0 年出生，助理工程师。Tel： 010-62403009 ) 3.6 60g/L磺基水杨酸：称取60g磺基水杨酸用水定容至1L。 3.7 0.1mol/L盐酸：量取8.3mL 盐酸用水稀释至1L。 3.8缓冲液：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/L。 3.9三聚氰胺标准品：：已知含量大于99%. 3.10标准储备液：称取三聚氰胺标准品 0.01g(准确至 0.0001g)，用甲醇配制成浓度为1mg/mL标准储备液。 3.11标准系列：将标准储备液用0.1mol/L 盐酸逐级稀释至0.25Hg/mL， 0.50mg/mL，1.00Hg/mL，2.00mg/mL， 4.00Hg/mL， 5.00Hg/mL， 10.0Hg/mL 的系列标准溶液。 4. 样品处理 4.1固态乳制品 称取1.0g左右试样(准确至0.0001g)，加入0. 1mol/L 盐酸约15mL，涡旋混匀，超声提取 30min 后加入60g/L 磺基水杨酸6mL-8mL，用 0. 1mol/L盐酸定容至 25mL，混匀后离心，上清液经0.45Hm的微孔滤膜过滤后进样。 4.2液态乳制品(包含酸奶) 称取15g左右试样(准确至0.0001g)， 加入60g/L磺基水杨酸3mL-4mL，用0.1mol/L盐酸定容至25mL， 混匀后离心，上清液经 0.45Mm 的微孔滤膜过滤后进样。 5.测定步骤 5.1色谱条件 5.1.1色谱柱： 柱1：0DS C8， 250mm×4.6mm， 5Hm或相当者； 柱2： C18，250mm×4.6mm， 5Hm或相当者。 5.1.2流动相：缓冲液：乙腈=85：15. 5.1.3流速：：11.0mL/min。 5.1.4柱温：40℃. 5.1.5波长：240nm. 5.2测定 5.2.1标准曲线制备 将标准系列0.25mg/mL， 0.50Hg/mL， 1.00Hg/mL， 2.00mg/mL， 4.00Hg/mL， 5.00Hg/mL， 10.0仙g/mL分别进样20L，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作图，制作标准曲线。 5.2.2样品测定 取制备好的试样溶液进样 20mL，进行液相色谱分析。根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。分别用柱1和柱2所做三聚氰胺的标准色谱图见图1和图4。 6.结果计算 试样中三聚氰胺的含量 (mg/kg)按式(1)计算： C×V m 式中：X一样品中三聚氰胺含量， mg/kg； C一从标准曲线上查出的含量， Hg/mL； V一定容体积， mL； m—称样量， g。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 7.结果与讨论 样品分析结果见下图。其中图2和图3为采用柱1所做的某奶粉样品三聚氰胺谱图，图5和图6为采用柱2所做的某奶粉样品三聚氰胺谱图。 图1三聚氰胺(浓度10ug/mL)标准品谱图(保留时间22.18) 图2奶粉样品三聚氰胺谱图 图3奶粉样品中无三聚氰胺谱图 图4三聚氰胺 (2ug/mL)标准品谱图(保留时间25.05) 图5牛奶中无三聚氰胺样品谱图 图6牛奶中三聚氰胺样品谱图 实验表明：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%，满足定量分析要求；在信噪比(S/N)为2：1的条件下，本方法定量检出限为1.0mg/kg；该方法可应用于乳品行业生产质量控制。