酶中酶促动力学检测方案(核酸蛋白分析)

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IMPLEN 封闭环境无挥发，更准确!利用超微量进行微量酶促反应监测 在进行微量样品的吸光度测量时，样品的挥发问题是关键影响因素之一。如果样品长时间以液柱或液滴形式暴露在空气中，由于挥发导致的样品浓缩将会使测量结果产生很大的误差。因此，传统的液柱拉伸法的超微量分光光度计，均为开放式的检测环境，需要较快速的操作，以降低挥发影响，也更难以对样品进行长时间的动力学监测。 而德国 Implen 的 NanophotometerQ超微量分光光度计司不同，由于采用样品压缩法进行测量，检测过程中无需形成液柱，样品包被在封闭的检测环境中，可以最大限度避免挥发的影响。因此，使用 NanophotometerQ不但可以测量易挥发的微量样品，还可以对样品进行较长时间的动力学监测，如获得酶促反应动力学的数据。 1 pl dsDNA (11440 ng/pl) EcoEoo 15 30 45607590105120 135150165180195 210 225240 255270 285300 timo in soconds 图： Implen NP80 和某品牌对比，反应了由于微量样品挥发导致的吸光度随时间的变化，蓝色曲线显示吸光度逐渐提高，，表示样品挥发导致了浓缩，而NP80十分稳定。 例如，华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室殷平教授团队，即即利用了NanophotometerQ的这一特点，进行了微量样品的酶促反应动力学监测，并获得了可靠的数据，并在《NucleicAcid Research》上发表了题为《DapFstabilizes thesubstrate-favoring Cconformation of RppH to stimulateits RNA-pyrophosphohydrolase activity in Escherichia coli》的文章。 文中研究人员使用NanophotometerQ N60 对2ul的微量样品进行酶促反应动力学监测，由于设备采用封闭的检测环境，最大限度的降低了挥发影响，使这一方法得以实现。使用仪器的“动力学测量”功能，通过2分钟，每5秒读取一次数据的持续监测，获得了相关动力学曲线以及不同酶浓度的△abs 与浓度函数数据。 A 图： RppH对 DapF表异构酶活性的影响。(A)用改进的 DapF-DAP脱氢酶偶联分光光度法测定 DapF的酶活性。在 340nm(A340)处连续记录吸光度 2min， 间隔5s。(B)在存在或不存在 RppH时，A340样品的初始变化率与 DapF 浓度的函数关系。在相同条件下对野生型 DapF 和突变型 DapF(Y268A)进行动力学研究。 这篇关于RNA 代谢的研究文章解析了第一个 RNA 的5'端三磷酸基团水解复合物的结构，清晰的解释了 DapF 蛋白促进 RppH活性的分子机制，为进一步寻找细菌中"去帽"复合物的新成员奠定了良好的基础。该研究不仅回答了细菌体内 mRNA降解的几个关键科学问题，并且为针对致病菌的药物开发能提供新的潜在作用靶点。 pppRNA 实践告诉我们，采用封闭的检测环境进行微量样品的吸光度测量，i可以最大限度的解决样品挥发问题，提高数据可靠性。这一点无论是对于常规的核酸、蛋白样品，还是进行动力学监测的样品，都至关重要。同时，封闭检测也避免了一些来自于环境、气流的外部污染，更好的保护了样品，利于测量结果的一致性。这也是Implen所采用的样品压缩技术的优势之一，使得 Nanophotometer@能够成为您科研道路上的可靠伙伴。 Implen GmbH 因普恩 ((北京)国际贸易有限公司 在进行微量样品的吸光度测量时，样品的挥发问题是关键影响因素之一。如果样品长时间以液柱或液滴形式暴露在空气中，由于挥发导致的样品浓缩将会使测量结果产生很大的误差。因此，传统的液柱拉伸法的超微量分光光度计，均为开放式的检测环境，需要较快速的操作，以降低挥发影响，也更难以对样品进行长时间的动力学监测。    而德国Implen的Nanophotometer®超微量分光光度计则不同，由于采用样品压缩法进行测量，检测过程中无需形成液柱，样品包被在封闭的检测环境中，可以有效的避免挥发的影响。因此，使用Nanophotometer®不但可以测量易挥发的微量样品，还可以对样品进行较长时间的动力学监测，如获得酶促反应动力学的数据。实践告诉我们，采用封闭的检测环境进行微量样品的吸光度测量，可以很好的解决样品挥发问题，提高数据可靠性。这一点无论是对于常规的核酸、蛋白样品，还是进行动力学监测的样品，都至关重要。同时，封闭检测也避免了一些来自于环境、气流的外部污染，更好的保护了样品，利于测量结果的一致性。这也是Implen所采用的样品压缩技术的优势之一，使得Nanophotometer®能够成为您科研道路上的可靠伙伴。