菌种中菌种检测方案(生物质谱)

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2#.pfl 解决方案| EbioReaderTM 3700M飞行时间质谱系统鉴定菌种 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorptionionization time-of-flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS) 作为新兴的微生物快速鉴定方法，是目前国内外微生物快速鉴定的研究热点，广泛应用于生命科学领域等多学科。 国家标准委于2017年发布了《基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则》 (GB/T 33682-2017)， MALDI-TOF MS 已经成为微生物菌种鉴定的标准方法。东西分析 EbioReaderTM 3700M 飞行时间质谱系统在微生物菌种鉴别方面做了许多工作，用户反应良好。本文对用户提供的样品在EbioReaderTM 3700M 飞行时间质谱系统平台上进行了分析，并对样品做出菌种鉴别分类，获得满意的效果。 主要设备与试剂 Ebio ReaderTM 3700M 飞行时间质谱系统，高速离心机； CHCA： MALDI-MS 的基质材料； 乙腈、三氟乙酸、I甲酸、乙醇、纯水 分析条件 项目 参数 加速电压 20KV 脉冲电压 5KV 聚焦电压 10KV 检测电压 2.6KV 延迟时间 500ns 延迟宽度 200ns 激光频率 20Hz 激光击打次数 200 激光能量 9.0% 质量范围 2000Da-15000Da 样品处理 样品信息 固体培养基培养的活菌，1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#和8#共8个样品。 其中1#菌种在培养基上没有菌落，无法进行检测(报告结尾处有照片)，其余7个样品均进行了质谱检测。 菌种蛋白提取 在Eppendorf 管中加入 300pl纯净水，挑取适量(5~10mg)菌体，混匀，再加入900 pl无水乙醇，混匀后以 12000r/min 离心 2min， 弃去上清液，待管中残留液体彻底干燥后，加入 50pl 70%甲酸，混匀，再加入50ul 乙腈，混匀，同样以12000r/min 离心2min， 吸取上清液，与等体积的基质溶液(CHCA)混合，然后涂布于96孔样品板上，自然晾干后进样。用校准品对仪器进行质量轴校正，随后利用 Ebio ReaderTM 3700M 质谱仪进行样品检测。 实验结果 本次实验分析了7个样品，详细实验结果如下。 样品测定结果 序列 靶点 质谱文件 结果(拉丁文) 结果(中文) 得分 日期 1 E4 3# Pasteurella multocida 多杀巴斯德菌 2.3131 2021/3/10 2 E6 4# Streptococcus suis 猪链球菌 2.0426 2021/3/10 3 F2 5# Salmonella sp (enterica st Hadar) 肠道沙门氏菌 2.1143 2021/3/10 4 F4 6# Escherichia coli 大肠埃希菌 2.3279 2021/3/10 5 D10 7# Clostridium perfringens 产气英膜梭菌 2.0965 2021/3/10 6 F8 8# Actinobacillus pleuropneumoniae 胸膜肺炎放线杆菌 1.9185 2021/3/10 7 G4 2# Erysipelothrix rhusiopathiae 猪红斑丹毒丝菌 1.9574 2021/3/10 图1：Ebio ReaderTM 3700M分析2#样品的质谱图 图2： Ebio ReaderTM3700M分析3#样品的质谱图 图3： Ebio ReaderTM3700M分析4#的质普图 图4： Ebio ReaderTM 3700M分析5#样品的质谱图 图5： Ebio ReaderTM 3700M分析6#样品的质谱图 图6： Ebio ReaderTM3700M分析7#样品的质谱图 图7： Ebio ReaderTM 3700M分析8#样品的质记图 结论： 根据所得图谱与数据库参考谱图匹配程度，软件可以计算得到从0~100的分值(对数值1~3)。根据质谱仪鉴定分值，>1.7时，结果高度可信。本实验中检测的7种菌的质谱结果均在1.7分以上，其中，3#和6#得分>2.3，表示高属水平鉴定，可能的种水平鉴定；2#和8#得分在 1.7-1.99之间，表示可能的菌属与菌种鉴定。 检测报告声明：测试结果仅对本次测测样品有效。 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）作为新兴的微生物快速鉴定方法，是目前国内外微生物快速鉴定的研究热点，广泛应用于生命科学领域等多学科。