茶叶中茶多酚检测方案(紫外分光光度计)

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【仪电分析】茶叶中茶多酚的检测-分光光度法 茶多酚(Tea Polyphenols)是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等，研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用。本实验参考国家标准 GB/T 8313-2018《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》，适用于茶及茶制品中儿茶素类和茶多酚含量的测定。 一、方法原理 茶叶磨碎样中的茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取，福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂氧化茶多酚中-OH基团并显蓝色，最大吸收波长入为765nm，用没食子酸作校正标准定量茶多酚。 二、主要仪器及试剂 a. 紫外分光光光计：L9； b. 分析天平； c. 水浴锅； d. 离心机； e. 甲醇； f. 碳酸钠； g. 甲醇水溶液(体积比)：7+3； h. 福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂； 1. 10%福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂(现配)：将20mL福林酚(Folin-Ciocalteu) 试挤(h)转移到200mL 容量瓶中，用水定容并摇匀。 j. 7.5% Na2CO3(质量浓度)：称取37.50g±0.01gNa2CO3，加适量水溶解，转移至 500mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀(室温下可保存1个月)。 k. 没食子酸储备溶液(1000ug/mL)：称取0.110g±0.001g 没食子酸(GA)，相对分子 量188.14)， 于100mL 容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀(现配)。 . 没食子酸工作液：用移液管分别移取1.0，2.0，3.0，4.0， 5.0mL的没食子酸标准储备溶液于100mL容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为10、20、30、，40、50 ng/mL。 三、实验方法 3.1供试液的制备 称取 0.2g(精确到 0.0001g)均匀磨碎的式样于 10mL离心管中，加入在70℃中预热过的 70%甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70℃水浴中，浸提10min (隔5min 搅拌一次)，浸提后冷却至室温，转入离心机在3500r/min 转速下离心10min，将上清液转移至10mL容量瓶。残渣再用5mL 的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作。合并提取液定容至10mL，摇匀。 移取上述溶液 1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。 3.2测定 用移液管分别移取没食子酸工作液、水(用作空白对照)及测试液各1.0mL于刻度管内，在每个试管内分别加入5.0mL的福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂，摇匀，反应 3min~8min内，加入4.0mL7.5%Na2CO3溶液，加水定容至刻度、摇匀。室温下放置 60min。用10nm比色皿、在765nm 波长下用分光光度计测定吸光度(A)。 根据没食子酸工作液的吸光度(A)与各工作液的没食子酸浓度，制作标准曲线。 四、实验结果 4.1计算公式 比较试样和标准工作液的吸光度，按下式计算： 式中： A一样品测试吸光度； V一样品提取液体积，10mL； d一稀释因子(通常为1mL 稀释成100mL， 则其稀释因子为100)； SLOPEstd 食没食子酸标准曲线的斜率； m一样品干物质的含量，，9%； A一样品测试吸光度 mi一样品质量，单位为克(g)。 4.2注意事项 样品吸光度应在没食子酸标准工作曲线的校准范围内，若样品吸光度高于 50 ug/mL 浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度，则应重新配制高浓度没食子酸标准工作液进行校准。 【仪电分析】茶叶中茶多酚的检测-分光光度法茶多酚(Tea Polyphenols)是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等，研究表明茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用。本实验参考国家标准GB/T 8313-2018《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》，适用于茶及茶制品中儿茶素类和茶多酚含量的测定。一、方法原理茶叶磨碎样中的茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取，福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂氧化茶多酚中-OH基团并显蓝色，最大吸收波长 λ为765nm，用没食子酸作校正标准定量茶多酚。二、主要仪器及试剂a. 紫外分光光度计：L9；b. 分析天平；c. 水浴锅；d. 离心机；e. 甲醇；f. 碳酸钠；g. 甲醇水溶液（体积比）：7+3；h. 福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂；i. 10%福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂（现配）：将20mL福林酚（Folin-Ciocalteu）试挤（h）转移到200mL容量瓶中，用水定容并摇匀。j. 7.5% Na2CO3（质量浓度）：称取37.50g±0.01g Na2CO3，加适量水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀（室温下可保存1个月）。k. 没食子酸储备溶液（1000μg/mL）：称取0.110g±0.001g没食子酸（GA），相对分子量188.14），于100mL容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀（现配）。l. 没食子酸工作液：用移液管分别移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL的没食子酸标准储备溶液于100mL容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为10、20、30、,40、50μg/mL。三、实验方法3.1供试液的制备称取0.2g（精确到0.0001g）均匀磨碎的式样于10mL离心管中，加入在70℃中预热过的70%甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70℃水浴中，浸提10min（隔5min搅拌一次），浸提后冷却至室温，转入离心机在3500r/min转速下离心10min，将上清液转移至10mL容量瓶。残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作。合并提取液定容至10mL，摇匀。移取上述溶液1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。3.2 测定用移液管分别移取没食子酸工作液、水（用作空白对照）及测试液各1.0mL于刻度管内，在每个试管内分别加入5.0mL的福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂，摇匀，反应3min~8min内，加入4.0mL7.5% Na2CO3溶液，加水定容至刻度、摇匀。室温下放置60min。用10nm比色皿、在765nm波长下用分光光度计测定吸光度（A）。根据没食子酸工作液的吸光度（A）与各工作液的没食子酸浓度，制作标准曲线。四、实验结果4.1计算公式比较试样和标准工作液的吸光度，按下式计算：茶多酚%=式中：A—样品测试吸光度；  V—样品提取液体积，10mL；d—稀释因子（通常为1mL稀释成100mL，则其稀释因子为100）；  SLOPEstd—没食子酸标准曲线的斜率；  m—样品干物质的含量，%；  A—样品测试吸光度；                m1—样品质量，单位为克（g）。4.2 注意事项  样品吸光度应在没食子酸标准工作曲线的校准范围内，若样品吸光度高于50μg/mL浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度，则应重新配制高浓度没食子酸标准工作液进行校准。