使用离心机进行外泌体（Exosome）分离纯化的标准方法

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目前外泌体研究是非常热门的课题，主要原因是外泌体在细胞内的信号传导中起到 了重要的作用, 故外泌体可以用于预诊断，治疗，及作为生物标记物。外泌体是细胞衍 生的膜泡，其由脂质双层形成，从细胞分泌出来，大小在20-200nm 之间，呈现于唾液， 血液，尿，羊水，等体液内。本文将介绍使用离心机进行分离纯化的标准方法：1. 首先使用差分离心进行粗纯化，步骤如下：1）. 收集细胞上清液或体液，在低离心力下进行离心 （300-500xg）, 离心约 10 分钟，除去细胞沉淀，将上清转到另一个离心管中2）. 增加离心力，2000-5000xg, 离心 10 分钟，进一步除去细胞沉淀，收取上清 到新的离心管3）. 增加离心力，在 10000xg 下将前面收集的上清进行离心，约 1 小时，收取沉 淀，则为粗纯化的外泌体 上述步骤可使用米立特高速冷冻离心机  及不同容量的转头进行离心 2. 密度梯度离心进行外泌体的进一步纯化： 将上述粗纯化的外泌体加入碘克沙醇（iodixanol）进行进一步纯化。步骤如下：步骤 1：使用碘克沙醇进行密度梯度离心来纯化外泌体步骤 2 分馏收集溶液并进行密度测试： 离心分离后, 每 2ml 溶液进行分布收集成 17 个样品管, 并对每管溶液进行屈光计检测. 根据每管溶液的屈光值进行密度计算.步骤 3. 确定含有外泌体的收集管： 外泌体应该存在于密度在 115-119g/cm3 的收集管，所以大概可以确定收集管#12 和 13 是纯化的外泌体。 步骤 4 清洗外泌体并保存： 使用 PBS 清洗外泌体并保存在 4℃。Application 使用日立超速离心机进行外泌体(Exosome)的分离纯化 什么是外泌体 (Exosome)? 一外泌体是细胞衍生的膜泡，呈现于生物体液，唾液，血液，尿，羊水，等体液内.外泌体 是由脂质双层形成，从细胞分泌出来，大小在20-200纳米之间.外泌体在细胞内的信号 传导中起到了重要的作用，，故很多研究人员认为外泌体可以用于预诊断，治疗，及作 为生物标记物. 本文将介绍使用日立超速离心机对外泌体进行纯化分离 步骤1：从唾液，，血液，尿液，等样品收集外泌体混合物，并进行清洗. 步骤2：使用碘克 沙 醇(iodi xa no l) 进行密度梯度离心来纯化外泌体 . 步骤3：分馏收集溶液并进行密度测试 离心分离后，每2ml溶液进行分布收集成17个样品管，并对每管溶液进行屈光计检测.根据每管溶液的屈光值进行密度计算. 步骤4：确定含有外泌体的收集管 图1.显示离心后每管溶液计算的密度值+ 外泌体 应该 存在于密度在1.15~1.19 g/cm3 的收集管，所以可以大概确定收集管 No.12及 No.13是纯化的外 泌 体 .+ 图2：使用 i odixanol 后离心的状态 步骤5：清洗外 泌 体并保存 . 使用 PB S 清洗 外 泌体并保存在4℃.(如果保存时间长，可以存储在-80℃) Reference ： “Exosome Analysis Master Lesson" published from YODOSHA CO.， LTD. in 2014+