紫外-可见分光光度法测定赣南风车子中总黄酮的含量

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引言风车子（Combretum alfredii hance）为使君子科风车子属植物，别名水番桃、清凉树、华风车子、四角风，分布于江西、湖南、广东、广西等地 。风车子属植物的根、茎、叶、花和种子均可入药，在不同地区被当作民间药广泛用于治疗肝炎、痢疾、呼吸道感染甚至癌症。现代药理研究表明该属植物具有保肝、抗炎、杀菌、抗癌和抗艾滋病等作用 ，其化学成分主要以二苯乙烯类、三萜化合物及菲类化合物为主，此外还有大环内酯类、黄酮类、脂肪酸类、生物碱类和甾体类化合物等。黄酮类成分可能是风车子属植物的主要药效成分之一，但目前对风车子黄酮类化合物的研究相对较少，本论文拟用紫外可见分光光度法测定风车子中总黄酮的含量，建立风车子总黄酮含量比色测定的方法，为风车子的进一步开发利用奠定理论基础。仪器与试剂高速万能粉碎机，十万分之一电子天平，数控超声波清洗器，紫外 - 可见分光光度计（UV1500，上海美析仪器有限公司），旋转蒸发仪，超纯水系统。芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号 ：100080-201610），超 纯 水（自制 ），乙 醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH 等试剂均为分析纯。风车子（市售）经赣南医学院彭金年副教授鉴定为使君子科风车子属植物风车子（Combretum alfredii hance）。方法与结果对照品溶液制备精密称取105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品20 mg，用60 % 乙醇溶解定容至100 mL，配制成0.2 mg/mL的芦丁对照品溶液。供试品溶液制备将风车子60 ℃烘干，用高速万能粉碎机粉碎，过40目药筛。精密称取1.000 g，置于250 mL 圆底烧瓶中，加入60% 乙醇后，置于超声波清洗机中进行提取（料液比1:34，提取时间60分钟 ），抽滤，滤渣同法再提取2次，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至适量，转移至50 mL 容量瓶，以60% 的乙醇定容至刻度，得风车子供试品溶液。标准曲线绘制精密吸取芦丁对照品溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10 mL，分别置于50 mL 容量瓶中，各加60% 乙醇溶液至12 mL，分别加入5% 亚硝酸钠溶液2 mL，摇匀，放置6 min，加入10% 硝酸铝溶液2 mL，摇匀后放置6 min，加入 4% 氢氧化钠溶液 20 mL，摇匀后放置5 min，加60% 乙醇溶液至刻度，摇匀后放置15 min。测量波长的确定 ：以未加芦丁对照品溶液的第1瓶溶液作空白，对加入8.0 mL 芦丁对照品溶液的第5瓶溶液在350~600 nm 范围内进行光谱扫描，得芦丁对照品显色后的吸收曲线 ；同法对风车子供试品溶液适量显色处理后扫描，得到风车子样品显色后的吸收曲线，结果见图1。对比芦丁对照品和风车子样品的吸收曲线，选择508 nm 为定量测量波长 。以未加芦丁对照品溶液的第1瓶溶液作空白，在定量波长508 nm 处测定各溶液的吸光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，线性拟合得回归方程y=8.652x-8.524E-4（R2=0.9986），线性范围0.008~0.040 mg/mL，见图2。风车子总黄酮含量测定取风车子供试品溶液0.5 mL，置于50 mL容量瓶中，依 2.3 项下方法依次加入显色剂，在508 nm 测定其吸光度，重复测定3次，以吸光度平均值根据回归方程计算风车子黄酮含量。结论与讨论风车子中黄酮类化合物经超声提取、硝酸铝显色后，可用紫外 - 可见分光光度法在508 nm 下定量测定。线性拟合得回归方程 y=8.652x-8.524E-4（R2=0.9986），线性范围0.008~0.040 mg/mL，测得赣南风车子中黄酮含量为（58.42±0.19）mg/g(n=3)，该方法操作简便、快捷、高效、结果准确、精密度和稳定性好，杂质干扰少。风车子是江西赣南地区的特色中药材之一，开发利用风车子对促进赣南特色中药材发展具有一定的意义，本文建立了超声提取、紫外 - 可见分光光度法测定风车子总黄酮含量的测定方法，可为开发利用赣南风车子总黄酮提供定量分析方法。