维生素B2中光解反应检测方案(液相色谱仪)

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上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.， Ltd.Application NoteAN0425-ZY0008 基于 eHPLC -LIF 联用技术研究维生素B2光解反应 1.背景介绍 维生素B2又称核黄素，是一种人体必需的水溶性维生素。在人体内主要以两种衍生物黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的形式存在，作为重要的氧化还原酶的辅基参与生物氧化反应及糖、蛋白质等的代谢。维生素B2因其结构中含有异咯嗪环，稳定性较差，遇光容易分解。目前对于药物稳定性的研究，包括维生素B2的光稳定性研究，通常是在固定离子强度的情况下进行的。然而，离子强度对药物稳定性及光解反应的速率有较大的影响。考察维生素B2在不同离子强度条件下的光照稳定性，首先需要建立维生素B2及降解产物的分析方法。目前，维生素B2多采用紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、荧光比色法等。UV 和 HPLC 的灵敏度欠佳，荧光分光光度法灵敏度高，但无法测定分解反应产生的有关物质。而高效微流电动液相色谱系统与激光诱导荧光检测器(eHPLC-LIF)微分离平台具有分离效率高和灵敏度高的优点，适于考察维生素B2溶液光解反应的速率与离子强度之间的关系。 2.测试条件 仪器： TriSep Q-3000高效微流电动液相色谱系统，配备 LIF 检测器 色谱柱： Globalsil C18色谱柱 (150mmx100um，1.8um) 3.测试结果 图1维生素B2、光黄素光解后的 eHPLC-LIF谱图 注：(a)维生素B2标准液；(b)光黄素标准液；(c)水溶液中的维生素B2暴光 2h； (d)PBS中的维生素B2暴光 2h；(e)水溶液中的维生素B2暴光24h； (f)PBS 中维生素B2暴光24h 4.结论 基于 eHPLC -LIF平台，建立了维生素B2及其荧光性分解产物的分析方法，实现了维生素B2及多种光降解产物的分析。 5.配置列表 仪器配置 TriSep Q-3000 高效微流电动液相色谱系统(配二元梯度泵、柱温箱、LIF检测器、高压电源、自动进样器、微流控、控制器) Clarity Lite 色谱工作站 www.unimicrotech.com.cn TEL： E-mail：info@unimicrotech.com.cn 维生素B2又称核黄素，是一种人体必需的水溶性维生素。在人体内主要以两种衍生物黄素单核苷酸（FMN）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）的形式存在，作为重要的氧化还原酶的辅基参与生物氧化反应及糖、蛋白质等的代谢。维生素Ｂ2因其结构中含有异咯嗪环，稳定性较差，遇光容易分解。目前对于药物稳定性的研究，包括维生素Ｂ2的光稳定性研究，通常是在固定离子强度的情况下进行的。然而，离子强度对药物稳定性及光解反应的速率有较大的影响。考察维生素Ｂ2在不同离子强度条件下的光照稳定性，首先需要建立维生素Ｂ2及降解产物的分析方法。目前，维生素Ｂ2多采用紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、荧光比色法等。UV 和HPLC的灵敏度欠佳，荧光分光光度法灵敏度高，但无法测定分解反应产生的有关物质。而高效微流电动液相色谱系统与激光诱导荧光检测器（eHPLC –LIF）微分离平台具有分离效率高和灵敏度高的优点，适于考察维生素Ｂ2溶液光解反应的速率与离子强度之间的关系。