人参中人参皂苷检测方案(快速溶剂萃取)

智能文字提取功能测试中

RASE-SH-111024 ASE-HPLC 分析检测人参 中的人参中皂苷 检测项目 人参皂苷 仪器型号 ASE350 UltiMate3000： HPG-3400WPS-3000TSL TCC-3000 DAD-3000 参考方法 2010版药典 实验员 车金水， 袁斌 最终审核 叶明立 人参为我国珍贵的中药材，在我国药用历史悠长。人参具有大补元气、强心固脱、安神生津之功效。其化学成分主要含有皂苷、糖类、蛋白质等，其中人参皂苷是主要活性成分，已确定结构的已有30余种。目前2010版药典中对人参中人参皂苷的提取方法为先采用索氏提取人参中的精油成分，然后经过浸泡过夜后采用水饱和的正丁醇进行超声提取。2010版药典方法前处理步骤繁多，耗时长，且溶剂消耗较大。 由戴安 (Dionex)生产的加速溶剂萃取仪(ASE)， 很好地解决了上述问题。加速溶剂萃取技术 (Accelerated Solvent Extraction， ASE) 是在较高的温度和压力下用溶剂萃取固体或半固体样品的新颖的样品前处理方法。在高温高压条件下，待测物从基体上的解吸和溶解动力学过程加快，可大大缩短提取时间，可减少溶剂的用量，同时提高对目标产物的提取率本文采用 ASE 提取， 建立序列(sequence) 的方式，分别用氯仿和甲醇顺序提取，能够在半个小时左右的时间内处理好样品，大大的节省了前处理时间及溶剂消耗。 1、材料与方法 人参皂苷标准品(HPLC级)Re、Rg1、Rf、Rc、Rb1和Rb2均购自成都思科华生物技术有限公司。精确称取标准品样品，用甲醇稀释至100ug/mL的混合标准溶液，逐级稀释至10、20、50ug/mL， 待 HPLC分析。 2、ASE 萃取 人参样品经切片后，采用粉碎机将人参样品粉碎，过30-50筛。精确称取1.00g人参样品，和硅藻土混合后，倒入事先垫有纤维素膜的萃取池 (SST， 10mL)中，按下列 ASE条件萃取。萃取液水浴蒸干，取5mL 甲醇复溶，过 0.45 um 滤膜， 待 HPLC分析。 表1ASE 萃取条件 条件 Step1 Step2 萃取溶剂 氯仿 甲醇 萃取温度 140℃ 140℃ 静态时间(min) 5 5 静态循环次数 2 2 吹扫体积 30% 60% 吹扫时间 200s 90s 总溶液消耗(ml) 总时间(min) 3、色谱条件 色谱柱： Acclaim C18，4.6x250mm， 5um，120A，PN：059149， SN：004594 流动相： A：水，B：乙腈 流速： 1.0ml/min 检测波长： 203nm 柱温： 35℃ 进样量： 10pL 时间 A B 梯度程序 -5 79 21 0 79 21 30 79 21 65 40 60 75 10 90 80 10 90 80.1 10 90 图1标准样品色谱图 图2样品色谱图 4、 ASE 萃取讨论 4.1萃取溶剂选择 本实验参照2010版药典方法，采用氯仿萃取人参中的精油类非极性成分，避免非极性成分对色谱柱的影响。经过氯仿萃取后，再对其中的人参皂苷进行提取。 2010版药典采用水饱和正丁醇萃取人参中的人参皂苷，然后将正丁醇蒸干，采用甲醇复溶，定容。但由于正丁醇沸点较高，水浴蒸干较为困难，耗时较长。本实验采用甲醇和水饱和的正丁醇作为萃取溶剂，比较甲醇和正丁醇对人参皂苷的萃取效率。实验结果表明，采用甲醇和水饱和的正丁醇作为萃取溶剂时，各种人参皂苷的萃取效率没有明显影响。但甲醇沸点较低，更容易蒸干，能够节省大量样品前处理时间。故本实验采用甲醇作为人参皂苷的提取溶剂。 4.2萃取温度选择 本实验研究了不同萃取温度(100℃、120℃、140℃和160℃)对人参中人参皂苷的提取。实验结果表明，随着提取温度的升高，对人参中人参皂苷的提取率也随之升高，于140℃时达到最佳；当温度达到160℃时，萃取液颜色变深，色谱图杂质峰增多。故本实验采用140℃作为本实验的萃取温度。 图3萃取温度对人参皂苷提取率的影响 4.3静态萃取时间和循环次数的选择 为研究静态萃取时间及循环次数对人参皂苷萃取效率的影响，本方法采用固定静态萃取时间(5min)的方法，考察不同循环次数中对人参皂苷的萃取量。实验结果表明，第一次萃取循环对6种人参皂苷的提取效率约为89%，第二次萃取循环对6种人参皂苷的提取效率约为10%，第三次萃取循环对6种人参皂苷的提取效率不到2%。故本实验采用两次萃取循环。 图4不同萃取次数对人参皂苷的提取比例 4.4和药典方法比较 药典方法：按2010版药典方法，精确称取1g 人参样品，置于索氏抽提器中，加100mL氯仿提取3小时。提取完毕，弃去氯仿，样品风干。将样品连同滤纸一起置于100mL 锥形瓶中，加入50mL水饱和的正丁醇，浸泡过夜。将浸泡后的样品置于超声波提取器中，超声提取半小时，补足重量，过滤，取25mL滤液，蒸干，加入5mL甲醇复溶，待 HPLC分析。 将药典推荐的萃取方法和 ASE 进行比较，实验结果表明(图5和表2)： ASE对人参中人参皂苷的提取效率要略高于药典推荐方法。且 ASE 只耗时 35min， 只消耗40mL有机溶剂，而药典方法需要耗时20多小时，溶剂消耗也达到了150mL。相比较， ASE 具有简单、快速、环保等特点，更加符合当今社会的要求。 图5ASE 和药典推荐方法对人参皂苷萃取比较 表2 ASE 和药典推荐方法对人参皂苷萃取比较 Method Re Rg1 Rf Rb1 Rc Rb2 USE 2.33 1.10 1.06 3.38 2.00 1.81 ASE 2.62 1.35 1.21 3.51 2.00 1.92 5、总结 采用 ASE 顺序提取法提取人参中的人参皂苷，相比较2010版药典推荐方法，达到了除脂和萃取有效成分同步完成的目的，节省了大量的操作步骤及操作时间，解放了劳动力。ASE和药典推荐方方相比较， ASE 对人参皂苷的提取率略高。同时 ASE 具有操作简单、快速高效等特点，值得在中药领域推广使用。 采用 ASE 顺序提取法提取人参中的人参皂苷，相比较 2010 版药典推荐方法，达到了除脂和萃取有效成分同步完成的目的，节省了大量的操作步骤及操作时间，解放了劳动力。ASE和药典推荐方法相比较，ASE 对人参皂苷的提取率略高。同时 ASE 具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推广使用。