补骨脂中补骨脂素检测方案(快速溶剂萃取)

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编号： RLC-SH-20110713 快速溶剂萃取(ASE)-高效液相色谱(HPLC) 法分析检测补骨脂中的补骨脂素 DIONEX 检测项目 补骨脂素 仪器设备 ASE350 UltiMate3000： LPG-3400 WPS-3000 TCC-3000VWD-3000 参考资料 2010版药典 方法开发 车金水 最终审核 叶明立 补骨脂为豆科植物补骨脂的成熟果实，性温味辛，具有补肾助阳，温中止泻，纳气平喘之功。现代药理研究表明，补骨脂具有抗肿瘤，升高白细胞，调节肾上腺皮质功能，促进吞噬细胞功能，改善细胞免疫功能，抗菌，抗病毒，增强机体免疫力，舒张支气管平滑肌的作用。2010版药典以补骨脂素和异补骨脂素的含量来监测补骨脂药材的质量。参照2010版药典，对补骨脂中补骨脂和异补骨脂素的提取需采用索氏提取提取，该前处理方法需要消耗大量的时间和溶剂。由戴安 (Dionex)生产的加速溶剂萃取仪 (ASE)，很好地解决了上述问题，具有简单、快速、溶剂消耗小、萃取效率高及环境污染小等优点。采用ASE提取，能够在20分钟内处理好样品，大大的节省了前处理时间及溶剂消耗。 1、 材料与方法 标准品配制：取补骨脂素标准品适量，精密称定，加甲醇配制成每1mL含20ug，即得。 2010版药典方法：补骨脂样品粉碎至30目左右，过30目筛。取样品粉末1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量h，加热回流提取2小时，放冷，转移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，待HPLC分析。 快速溶剂萃取(ASE)样品处理方法：取补骨脂样品粉末1g，精密称定，加入硅藻土(DE) 适量，混合均匀，转至底层垫有纤维素膜的萃取池(10mL)中，快速溶剂萃取，浓缩至近干，残渣加甲醇溶解，定容，滤过，待HPLC分析。 2、、仪器条件 2.1 ASE条件： 表1 ASE萃取条件 ASE条件 参数 溶剂 甲醇 温度 80℃ 加热时间 5min 静态萃取时间 5min 循环次数 1 吹扫体积 60% 吹扫时间 90s 总体积 15mL 总时间 12min 2.2HPLC条件 色谱柱 Acclaim 120 C18， 120A， 4.6mm*250mm*5um 流动相 甲醇-水 (55：45) 流速 1.0mL/min 柱温 30℃ 检测器 UV@246 nm 进样量 10pL 图1标准品(上)及样品(下)色谱图 3、ASE条件选择 3.1溶剂的选择 本实验参考2010版药典方法，分别采用甲醇作为ASE萃取溶剂。 3.3萃取温度的选择 本实验分别考察了60℃、80℃、100℃、120℃和140℃5个温度对补骨脂中的补骨脂素萃取率的影响。随着温度的升高，补骨脂素的萃取效率随着增大，于80℃是达到最佳萃取率，为1.63%(图2)；随着温度继续升高补骨脂素的萃取率逐渐下降，故本研究选择80℃作为最佳萃取温度。 图2萃取温度对补骨脂素萃取率的影响 3.4静态萃取时间及循环次数 本方法为了研究静态萃取时间和循环次数对补骨脂中补骨脂素的萃取效率，本实验采用5min作为静态萃取时间，对同一样品进行了单次循环实验。实验结果表明，第一次萃取循环萃取补骨脂素的萃取量占三次萃取循环总量的96.5%，第二次萃取循环萃取补骨脂素的萃取量占三次萃取循环总量的2.6%，第三次萃取循环萃取补骨脂素的萃取量占三次萃取循环总量的0.9%。故以静态萃取5min，单次萃取循环作为本实验的静态萃取时间和萃取循环次数。 1.2 图3各次萃取循环萃取量占3次循环总萃取量得比值 3.5 ASE和索氏萃取的比较 为比较快速溶剂萃取与2010版药典中索氏提取(SE)对补骨脂素的提取效率，采用ASE和 SE对同一中药样品进行萃取。ASE 对补骨脂中的补骨脂素的平均萃取率为1.58%， RSD 为2.6%(n=3)。 SE 对补骨脂中补骨脂素的平均提取率为1.34%， RSD 为4.7%(n=3)。 ASE的提取率较传统的索氏提取提高了约17%，且RSD 更好。同时比较溶剂消耗量，耗时， ASE具有速度快、溶剂消耗小等优点。 表3 ASE和SE比较 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE lg 15mL 12min 1.58% 2.6% SE lg 100mL 3h 1.34% 4.7% 4、结论 采用 ASE 提取补骨脂中的补骨脂素，提取结果满足2010版药典所规定的限值。同时比较了 ASE和2010版药典推荐方法对补骨脂素的提取率， ASE 对补骨脂的提取效率较药典方法提高了17%。采用 ASE 提取中药中的活性成分时，既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率，同时具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推推使用。 采用 ASE 提取补骨脂中的补骨脂素， 提取结果满足 2010 版药典所规定的限值。同时比较了 ASE 和 2010 版药典推荐方法对补骨脂素的提取率，ASE 对补骨脂的提取效率较药典方法提高了 17%。采用 ASE 提取中药中的活性成分时，既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率，同时具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推广使用。