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SDPTOP 饲料中17种氨基酸的测定 氨基酸是动物的生长发育及动物体内营养物质的正常代谢所必须的重要组分,因此是评价饲料营养成分的一类重要指标,准确检测氨基酸的含量和种类对于饲料质量评价和控制具有重要意义。本文采用柱前衍生法,可同时对饲料中的17种氨基酸进行分析测定。 一、实验部分 1.1仪器与试剂 LC1620A 高效液相色谱仪(含UV检测器1台,P1620A高压恒流泵2台,上海舜宇恒平科学仪器有限公司) FA2004 电子分析天平 恒温箱 水解管(5型) 旋涡混匀器 氢氧火焰机 乙腈(色谱纯,沃凯) 氨基酸标准品溶液(上海月旭) 超纯水 2,4-二硝基氟苯(DNFB)、N,N-二甲基酰胺、浓盐酸、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钠、冰醋酸(均为分析纯)。 1.2标准品溶液配制 1)氨基酸标准品溶液:氨基酸标准品溶液用水稀释10倍到所需浓度(见表1)。 2)衍生化缓冲液的配制:称取21g 的 NaHCO3于1L烧杯中,加水470mL,摇匀、溶解。过滤至500mL试剂瓶中,再加乙乙30mL,摇匀即得。 3)衍生化试剂:取1mLDNFB加入100mL定量瓶中,乙腈定容至刻度即得。 4)平衡溶液的配制:取KH2PO43.4g, 加 0.1mol/L 的 NaOH 溶液 145.5mL, 加水至500ml,摇匀,过滤,贮存置棕色瓶中即得。 5)6mol/L盐酸:耳取浓盐酸 500mL 加入1L烧杯中,再加水500mL,摇匀即得。 表1十七种氨基酸浓度表 名称 简写 MW C(mmol/L) 名称 简写 MW C(mmol/L) 天冬氨酸 Asp 133.10 0.25 蛋氨酸 Met 149.21 0.25 谷氨酸 Glu 147.13 0.25 半胱氨酸 Cys l21.15 0.125 丝氨酸 Ser 105.09 0.25 异亮氨酸 Ile 131.17 0.25 精氨酸 Arg 174.20 0.25 亮氨酸 Leu 131.17 0.25 甘氨酸 Gly 75.067 0.25 苯丙氨酸 Phe 165.19 0.25 苏氨酸 Thr 119.12 0.25 组氨酸 His 155.15 0.25 脯氨酸 Pro 115.13 0.25 赖氨酸 Lys 146.19 0.25 丙氨酸 Ala 89.093 0.25 酪氨酸 Tyr 181.19 0.25 缬氨酸 Val 117.15 0.25 一 1.3色谱条件: 色谱柱: Welch unitary Amino acid 柱(4.6×250mm, 5um) 流动相: A: 40mM乙酸钠缓冲液(冰醋酸调pH调至6.5)(含10mM N,N-二甲基酰胺)B:乙:水=1:1,梯度洗脱(见表2) 流速:1.2mL/min 柱温:28℃ 波长:360nm 进样量:10ul 表2梯度程序表 No. 时间(min) 流动相(A%) 流动相(B%) 1 0 84 16 2 0.3 84 16 3 4 69 31 4 9.5 64 36 5 17 45 55 6 28 35 65 7 34 100 8 36 100 9 37 84 16 10 46 84 16 1.4样品前处理(氨基酸衍生化方法) 1、精确称取研磨成细粉的样本粉末200mg 置于水解管中,加入 6mol/L 的盐酸12mL,轻微震荡。用氢氧火焰机融化水解管颈部完全密封。 2、放于烘箱中145℃水解4小时,冷却至室温; 3、小心敲碎水解管顶部;把水解液及残渣用漏斗和滤纸过滤,滤至50mL容量瓶中;再用水洗涤水解管,每次洗涤水均再次洗涤滤纸,反复6-7次,然后加水定容至容量瓶刻度; 4、用微量注射器取10ul定量好的溶液至 1mL 玻璃细管中,真空抽干(去HCl),然后依次加入衍生化缓冲液和衍生化试剂各20ul, 涡旋30s,用多层密封带封口; 5、置烘箱中64℃衍生化 30min,冷却至室温; 6、加平衡缓冲液160ul,混匀30s,经0.45um 滤膜过滤,作为待测样品溶液。 二、实验结果 2.1 实验数据(峰面积及保留时间) 分别用 Welch unitary Amino acid 柱和 ACCHROM unitary 柱分析饲料样品,连续进样3次,计算峰面积和保留时间的相对标准偏差,结果如下: 表3氨基酸(饲料)-Welch unitary Amino acid 色谱柱峰面积 峰面积值/名称 Met Cys lle Leu Phe His Lys Tyr Val 1 383.0 787.1 316.0 443.6 919.7 145.6 1045.0 425.4 一 2 369.7 772.1 312.8 431.9 860.6 142.3 978.7 431.3 460.6 3 362.3 777.1 335.5 418.0 853.9 134.6 1030.5 432.5 456.4 平均值 371.7 778.8 321.4 431.2 878.1 140.8 1018.1 429.8 465.7 RSD% 1.2 0.5 3.0 3.5 4.1 4.0 2.5 2.6 - 表4氨基酸(饲料)-Welch unitary Amino acid 色谱柱保留时间数据 上海舜宇恒平科学仪器有限公司 保留时间/名称 Met Cys lle Leu Phe His Lys Tyr Val 1 26.9 29.8 32.1 32.6 34.6 35.2 38.5 40.9 25.2 2 27.7 31.0 32.5 33.0 34.9 35.3 38.6 40.9 26.0 3 27.6 30.8 32.4 32.9 34.9 35.2 38.5 40.8 25.9 平均值 27.4 30.5 32.3 32.9 34.8 35.2 38.5 40.9 25.7 RSD% 1.6 2.1 0.7 0.7 0.5 0.1 0.1 0.2 1.6 2.2 实验图谱 SHP-氨基酸标准图谱(饲料)-Welch unitary Amino acid 色谱柱 L SHP-氨基酸标准图谱(鱼粉)-ACCHROM unitary 色谱柱 2.3 结论 采用 LC1620A 高效液相色谱仪,使用柱前衍生法,能有效分离饲饲中的17种氨基酸,且方法精密度良好。 L 上海舜宇恒平科学仪器有限公司SHANGHAI SUNNY HENGPING SCIENTIFIC INSTRUMENT CO.,LTD. 上海舜宇恒平科学仪器有限公司SHANGHAI SUNNY HENGPING SCIENTIFIC INSTRUMENT CO.,LTD. 饲料中17种氨基酸的测定氨基酸是动物的生长发育及动物体内营养物质的正常代谢所必须的重要组分,因此是评价饲料营养成分的一类重要指标,准确检测氨基酸的含量和种类对于饲料质量评价和控制具有重要意义。本文采用柱前衍生法,可同时对饲料中的17种氨基酸进行分析测定。
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上海舜宇恒平科学仪器有限公司为您提供《饲料中组氨酸检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于饲料中组氨酸检测,参考标准《暂无》,《饲料中组氨酸检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有舜宇恒平LC1620A高效液相色谱仪。
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