草莓中抗坏血酸检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA20-241Excellence in Science Excellence in ScienceLC-221 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 高效液相色谱法测定食品中的抗坏血酸 LC-221 摘要：本文建立了一种岛津液相色谱仪 LC-20A 测定食品中抗中抗酸的方法。样品按照国标《GB/T 5009.86-2016》处理，经过滤后进样，， 以 Shim-pack GIST C18-AQ柱分离，紫外检测器检测，分离度达到6.5以上，L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸在 0.5 ug/mL~50 ug/mL浓度范围内线性良好，相关系数 r>0.9995。对0.5ug/mL混合标准溶液连续6次进样， L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸峰面积相对标准偏差分别在1.69%和1.12%，仪器精密度良好。仪器的检出限分别为 0.064 ug/mL 和0.070 ug/mL， L(+)-抗坏血酸和 D(+)-抗坏血酸平均回收率为75.66%和100.31%。 关键词：高效液相色谱仪食品抗坏血酸 成损害的。 《GB/T 5009.86-2016食品中抗坏血酸的测定》标准中规定有高效液相色谱法、荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法，本实验主要参照标准中的实验条件，采用岛津 LC-20A 高效液相色谱仪对草莓中的抗坏血酸进行测定，供相关人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 ProminenceLC-20A 高效液相色谱仪，具体配置为： 系统控制器： CBM-20A Lite脱气机：DGU-20A3R输液泵： LC-20AT自动进样器： SIL-20AC柱温箱： CTO-20AC检测器： SPD-20AV 色谱工作站： Labsolutions Ver 6.72 SP1 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18-AQ 色谱柱 (250mm LX4.6 mml.D.，5um)；； P/N： 227-30742-08；岛津(上海)实验器材有限公司 流动相： A：6.8g磷酸二氢钾和 0.91g十六烷基三甲基溴化铵，用水溶解并定容至1.00 L； B：100%甲醇，按A： B=98： 2 (V/V)混合 流速：1.0mL/min流速： 1mL/min柱温：25℃检测波长：245nm进样量：20uL洗脱方式：等度洗脱 样品制备 2.1标准溶液配制： L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸混合标准储备溶液(1.000 mg/mL)：准确称取L (+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01 mg)，准确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g (精确至0.01 mg)， 用20 g/L的偏磷酸溶液定容至10ml。该贮备液在2C~8℃避光条件下可保存一周。 将 1000 ug/mL 混合标准溶液用20 g/L 的偏磷酸溶液逐级稀释至浓度为0.5、5、10、25、50 ug/mL的标准工作液。 2.2样品前处理方法： 取100g左右草莓样品加入等质量的 20 g/L 的偏磷酸溶液，经匀质机匀质并混合均匀后，称取相对于草莓样品约2g(精确至0.0001g) 混合均匀的匀浆试样于50 mL烧杯中，用20 g/L的偏磷酸溶液将试样转移至50 mL容量瓶中，震荡溶解并定容。摇匀，全部转移至50mL离心管中，超声提取 5 min 后， 于 4000 r/min 离心5 min，取上清液过0.45 um 水相滤膜，滤液待测。 准确吸取20 mL 上述离心后的上清液于50mL离心管中，加入10 mL 40 g/L 的半胱氨酸溶液，用100 g/L磷酸三钠溶液调节 pH至7.2， 以200次/min 振荡 5 min。再用磷酸调节 pH至2.8，用水将试液全部转移至 50 mL容量瓶中，并定容至刻度。混匀后取此试液过 0.45 um 水相滤膜后待。 结果与讨论 3.1标准样品的色谱图 浓度为5ug/mL的混合标准样品的色谱如图1所示， L(+)-抗坏血酸和 D(+)-抗坏血酸标准样品信息如表1所示。 表1L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸标准溶液 (5ug/mL)色谱图参数 化合物名 保留时间 浓度(ug/mL) 面积 分离度 理论塔板数 L(+)-抗坏血酸 23.01 5.00 193304 10128 D(+)-抗坏血酸 29.76 5.00 186515 6.58 10961 3.2线性关系、检出限与定量限 将浓度为0.5、5、10、25、50 ug/mL 的混合标准工作液按1.2中的分析条件进行测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法制作校准曲线，如图2所示。L(+)-抗坏血酸和 D(+)-抗坏血酸在浓度范围内校准曲线线性良好。线性方程、线性范围相关系数见表2所示。 以S/N=3 为检出限， S/N=10为定量限，测得 L(+)-抗坏血酸和 D(+)-抗坏血酸的检出限与定量限如表2所示。 L(+)-抗坏血酸 图2：1标准品标准曲线 表2 L(+)-抗坏血酸和 D(+)-抗坏血酸的校准曲线参数与检出限、定量限 名称 校准曲线 相关系数r 检出限 (ug/mL) 定量限 (ug/mL) L(+)- 抗坏血酸 Y=(44997.7)X- (25994.3) 0.9999 0.064 0.21 D(+)-抗坏血酸 Y=(42991.1)X- (22851.3) 0.9999 0.070 0.23 3.3精密度实验 对浓度为 0.5 ug/mL混合溶准溶液连续6次进样， L(+)-抗坏血酸的峰面积和保留时间相对标准偏差分别是1.69%，0.14%和D(+)-抗坏血酸的峰面积和保留时间相对标准偏差分别是1.12%，0.13%之间，仪器精密度良好，结果见表3。 表3L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸标准溶液 (0.5ug/mL) 峰面积和保留时间重复性结果(n=6) L(+)-抗坏血酸 D(+)-抗坏血酸 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 1 12942 23.06 11706 29.80 2 12633 23.07 11683 29.82 3 12808 23.13 11465 29.87 4 12424 23.09 11709 29.85 5 12460 23.10 11415 29.87 6 12468 23.03 11644 29.80 RSD(%) 1.69 0.14 1.12 0.13 3.4回收率实验 将所建立的分析方法用于实际样品分析，同时在此样品中添加浓度为6mg/100 g的混合标准溶液，按2.2前处理方法处理3个平行加标样品，图3为草莓样品的色谱图，图4为加标样品色谱谱，加标回收率结果见表4。 图33草莓样品色谱图 图4 加标样品色谱图 表4 L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的回收率 名称 样品中含量 加标量 加标样品中测得总量量(mg/100g) 平均回收率 (mg/100g) (mg/100g) 样品1 样品2 样品3 (%) L(+)-抗坏血酸 28.67 6.00 33.41 33.29 32.94 75.66 D(+)-抗坏血酸 0.00 6.00 6.08 6.23 6.01 101.77 结论 本文采用岛津 LC-20A 高效液相色谱系统，参考《GB/T 5009.86-2016食品中抗坏血酸的测定》中规定的检测方法，建立了一种测定草莓中抗坏血酸的方法。该方法检测灵敏度高，重复性好，系统统密度良好。实验表明，该方法满足标准中的各项规定，可用于食品中抗坏血酸的检测。 岛津应用云 建立了一种岛津液相色谱仪LC-20A测定食品中抗坏血酸的方法。样品按照国标《GB/T 5009.86-2016 》处理，经过滤后进样，以Shim-pack GIST C18-AQ柱分离，紫外检测器检测，分离度达到6.5以上，L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸在0.5 μg/mL~50 μg/mL浓度范围内线性良好，相关系数r>0.9995。对0.5 μg/mL混合标准溶液连续6次进样，L(+)-抗坏血酸、D(+)-抗坏血酸峰面积相对标准偏差分别在1.69 %和1.12 %，仪器精密度良好。仪器的检出限分别为0.064 μg/mL和0.070 μg/mL，L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸平均回收率为75.66 %和100.31 %。