〓疯子哥〓
第1楼2007/11/03
2 色谱条件
交联石英毛细管柱(40 m×0.53 mm,自制),固定相:SE30。
气化室:240℃,检测室:280℃(FID),载气:N 2并加尾吹N 2。
柱温:100℃(4 min)以20℃/min升至210℃保持5 min。
3 超临界萃取条件的选择 [2,3]
3.1 改性剂的选择 超临界CO 2流体的极性与正已烷相似 [4] ,因此在萃取极性成分时,一般加入少量的极性溶剂,以提高萃取率。我们试验了氯仿和甲醇两种溶剂,当选择甲醇作改性剂时,除了药材中丹皮酚被萃取外,丹皮酚甙、丹皮原甙也被少量萃取,引起结果误差,因此本实验选择了氯仿作改性剂。
3.2 萃取压力的选择 超临界流体具有很大的可压性,一定温度下,压力增加,超临界流体的密度也增加,溶质在流体中的溶解度增大,萃取效率提高,固定其他参数,改变压力从3000~6000 psi,每隔1000 psi萃取一个点,其结果见图1(A)。
从图中看出:选择4000 psi作萃取压力。
3.3 温度的影响 恒压下,温度升高,流体的密度下降,但溶解度是溶质挥发度的函数,提高温度可指数级地提高溶质的蒸气压,从而增加溶质的溶解度,提高萃取效率,改变温度从50~100℃,每隔10℃萃取一个点,结果见图1(B)。从图中看出:选择90℃为萃取温度。
3.4 改性剂量的选择 加入一定量的极性改性剂,可以提高萃取量,但过高浓度的改性剂,要求高的临界压力和温度,因此改性剂的浓度要合适,既能达到萃取完全,又不致很高的萃取条件,我们试验了加入0.3,0.5,0.7 ml三个浓度,结果见图1(C)。由图中看出,选择加入0.5 ml氯仿,萃取效果较好。
3.5 动态萃取体积 固定压力、温度和改性剂量,改变萃取体积为1、2、3、5 ml,其萃取结果见图1(D)。
由图中看出,选择3 ml为动态萃取体积。
3.6 静态萃取时间 整个超临界流体萃取过程既包含转运,又存在扩散,保持一定的静态时间,可提高萃取效率,因此我们试验了分别保持3、5、7 min三种时间,结果见图1(E)。由图中看出,静态萃取时间为5分钟。
通过试验,确定了5个变量的最佳条件为:温度90℃;压力4000 psi;改性剂(氯仿)加入量0.5 ml;动态萃取体积3 ml;静态萃取时间5 min。
4 标准曲线的绘制
精密量取丹皮酚标准液(10.00 mg/ml)0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 ml,分别置于5 ml容量瓶中,各精密加入0.5 ml十六醇内标溶液(4.00 mg/ml),用氯仿加至刻度,混匀后进样测定,以丹皮酚与内标的峰面积比(Y)对进样浓度(X)进行回归,回归方程为:Y=1.8619X-0.1024(r=0.9999)
5 加样回收率试验
精密称取一定量药材粉末及制剂,精密加入一定量的丹皮酚标准液,按样品分析同样操作,进行回收率测定。药材回收率为97.8%,RSD=2.35%(n=3);制剂回收率为100.3%,RSD=1.89%(n=3)。
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第2楼2007/11/03
6 样品分析
精密称取一定量药材粉末及制剂,按上述最佳条件进行提取,然后精密加入1 ml内标溶液于吸收液中,氯仿定容至10 ml,直接进样分析,计算药材及成药中丹皮酚的含量,结果见表1。
表1 药材及制剂中的丹皮酚含量
Sample
Paeonol(%)
RSD(%)
moudanpi
0.99
0.82
liuweidihuangwan
0.21
1.70
zhibaidihuangwan
0.15
2.31
qijudihauangwan
0.19
4.56
7 讨论
大孔径毛细管柱有较高的总柱效、理想的表面惰性、接近填充柱的负荷量、较长的柱寿命及较快的分析速度、并可用标准微升注射器作柱上进样或直接进样[5] 。本实验用SFE与大孔径毛细管气相色谱测定中药中丹皮酚的含量,峰形好、分离速度快,为该类药物的质量控制提供了一种可行的定量方法。
SFE是近几年发展起来的新技术。其提取具有一定的选择性,提取的杂质较少,并可直接进样分析,是传统的溶剂提取所无法比拟的。为有效成分的提取提供了一种有效可靠的方法。采用内标法定量,结果比较准确。