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【资料】GB/T22400-2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法

小白

2008/10/20

乳制品检测

继10月7号发布的《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》，10月15号又发布了《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》。关注三聚氰胺检测的朋友可以看下哦~~
1 范围
本标准规定了液相色谱法快速检测原料乳中三聚氰胺的方法。
本标准适用于原料乳，也适用于不含添加物的液态乳制品。
本标准定量检测范围为0.30mg/kg～100.0mg/kg，方法检测限为0.05mg/kg。
注：当原料乳中三聚氰胺的含量大于100.0mg/kg时，具体操作方法见6.2.2.3.2。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的
修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准
GB/T6379.1 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义
GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与
再现性的基本方法
GB/T6682 分析实验室用水规格和实验方法
3 原理
用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱
-紫外检测器/二极管阵列检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。
4.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.2 磷酸（H3PO4）。
4.3 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
4.4 三聚氰胺标准物质（C3H6N6）：纯度大于或等于99%。
3
4.5 三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×10 mg/L。
称取100mg 三聚氰胺标准物质（准确至0.1mg），用水完全溶解后，100 mL 容量瓶中定容至刻度，
混匀，4℃条件下避光保存，有效期为1个月。
4.6 标准工作溶液：使用时配制。
2
4.6.1 标准溶液A：2.00×10 mg/L。
准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液（4.5），置于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
4.6.2 标准溶液B：0.50mg/L。
准确移取0.25mL 标准溶液A（4.6.1），置于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
4.6.3 按表1 分别移取不同体积的标准溶液A（4.6.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。按表2
分别移取不同体积的标准溶液B（4.6.2）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

4.7 磷酸盐缓冲液：0.05 mol/L。
称取6.8g磷酸二氢钾（4.3）（准确至0.01g），加水800mL完全溶解后，用磷酸（4.2）调节pH至3.0，
用水稀释至1L，用滤膜（4.9）过滤后备用。
4.8 一次性注射器：2 mL。
4.9 滤膜：水相，0.45μm。
4.10 针式过滤器：有机相，0.45μm。
4.11 具塞刻度试管：50mL。
5 仪器
5.1 液相色谱仪：配有紫外检测器/二极管阵列检测器。
5.2 分析天平：感量0.0001g和0.01g。
5.3 pH计：测量精度±0.02。
5.4 溶剂过滤器。
6 测定步骤
6.1 试样的制备
称取混合均匀的15 g原料乳样品（准确至0.01g），置于50mL具塞刻度试管（4.11）中，加入30mL
乙腈（4.1），剧烈振荡6 min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3 min，用一次性注射器（4.8）吸
取上清液用针式过滤器（4.10）过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。
6.2 高效液相色谱测定
6.2.1 色谱条件
a) 色谱柱：强阳离子交换色谱柱，SCX，250 mm× 4.6mm（i.d.），5 μm，或性能相当者。
注：宜在色谱柱前加保护柱（或预柱），以延长色谱柱使用寿命。
b) 流动相：磷酸盐缓冲溶液（4.7）- 乙腈（70+30，体积比），混匀。
c) 流速：1.5mL/min。
d) 柱温：室温。
e) 检测波长：240nm。
f) 进样量：20μL。
6.2.2 液相色谱分析测定
6.2.2.1 仪器的准备
开机，用流动相平衡色谱柱，待基线稳定后开始进样。
6.2.2.2 定性分析
依据保留时间一致性进行定性识别的方法。根据三聚氰胺标准物质的保留时间，确定样品中三聚氰
胺的色谱峰（参见附录A）。必要时应采用其他方法进一步定性确证。
6.2.2.3 定量分析
校准方法为外标法。
6.2.2.3.1 校准曲线制作
根据检测需要，使用标准工作溶液（4.6.3）分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为
纵坐标，绘制校准曲线。
6.2.2.3.2 试样测定
使用试样（6.1）分别进样，获得目标峰面积。根据校准曲线计算被测试样中三聚氰胺的含量（mg/kg）。
试样中待测三聚氰胺的响应值均应在方法线性范围内。
注：当试样中三聚氰胺的响应值超出方法的线性范围的上限时，可减少称样量再进行提取与测定。
6.2.3 结果计算
6.2.3.1 计算公式
结果按式（1）计算：
V 1000
X =c× × ……………………………（1）
m 1000
式中：
X——原料乳中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——从校准曲线得到的三聚氰胺溶液的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；
m——样品称量质量，单位为克（g）。
6.2.3.2 计算结果有效数字
通常情况下计算结果保留3位有效数字；结果在0.1~1.0mg/kg时，保留2位有效数字；结果小于0.1
mg/kg时，保留1位有效数字。
6.3 平行试验
按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。
6.4 空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤同时完成空白试验。
6.5 方法检测限
本方法的检测限为0.05mg/kg。
6.6 回收率
在添加浓度0.30 mg/kg~100.0mg/kg范围内，回收率在93.0%~103%之间，相对标准偏差小于10%。
7 精密度
本标准精密度数据按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定，其重复性和再现性值以95%的置信度
计算。
7.1 重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测量结果的绝对差值不超过重复性限r，样品中三聚氰胺含量范
围及重复性方程见表3。
如果两次测定值的差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。
7.2 再现性
在再现性的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，样品中三聚氰胺的含
量范围及再现性方程见表3。

8 试验报告
试验报告应包括以下内容：
a) 鉴别样品、实验室和分析日期等资料；
b) 遵守本标准规定的程度；
c) 分析结果及其表示；
d) 测定中观察到的异常现象；
e) 对分析结果可能有影响而本部分未包括的操作或者任选的操作。
9 质量保证
a) 操作人员应按照国家相关规定，并具备从事相应实验技术的能力；
b) 仪器及相关计量器具应通过检定或校准，并在有效使用期内；
c) 宜采用有证标准物质，若采用自配标样，应使用有证标准物质对自配标样进行验证；
d) 原料乳样采集和保存应严格执行本标准和国家相关规定，实施全过程质量保证。
10 注意事项
a) 如果保留时间或柱压发生明显的变化，应检测离子交换色谱柱的柱效以保证检测结果的可靠性；
b) 使用不同的离子交换色谱柱，其保留时间有较大的
c) 强阳离子交换色谱的流动相为酸性体系，每天结束实验时应以中性流动相冲洗仪器系统进行维护保养.

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无名

第1楼2008/10/20

重复，标准区已经提供了该检测标准的分享

0

叮咚

第2楼2008/10/23

希望版主把三聚氰胺的检测方法搞个汇总，方便大家查阅，这样就不会有重复的了

0

qinglin171

第3楼2008/10/23

本人全程参与了该标准的起草、修改、评审及相关实验过程，对该标准比较了解，如有需要，希望能为使用该方法的人提供帮助。

0

pingguwu

第4楼2008/10/23

如果原料乳也许含量2.5ppm,其实检测限没有必要到0.05,不然还得麻烦液质，小于0.5的都可以PASS.

0

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