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【第二届网络原创作品大赛】一次液相色谱柱压分析（9月）

宁夏恋冰

2009/09/21

综合仪器采购

摘要：在液相分析过程中，通常会出现随着使用时间的延长，色谱柱压慢慢上升的现象，所以每次做完样品分析之后都会用流动相继续冲洗整个系统。柱压在一定程度上反映了色谱柱的的分离效果，但如果流动相使用正确，足够长的冲洗时间之后，柱压还一直“居高不下”（比开机时柱压高很多）的情况出现，这就需要我们仔细分析原因，有针对的采取措施，以求尽可能地恢复其使用前的状态。

简介：岛津10AT液相色谱仪、4.6×150mmC18柱、
温度：24℃ 湿度：40%
样品：农药50%烯酰吗啉水分散粒剂（甲醇溶解定容后离心，取上清液）流动相：甲醇+水=90+10 波长：220nm 流速：1mL/min

1.问题出现
开机柱压4.0MPa(流动相100%甲醇)，分析过程中柱压6.2-7.0MPa(流动相甲醇+水=90+10)，分析后柱压5.7MPa（流动相100%甲醇冲洗半小时之后）

2.分析问题
造成柱压升高的原因有很多，通过查阅资料主要表现在以下方面：
1）流动相过滤不良
这往往是由于流动相没有过滤，或者虽然已经过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏，使得固体杂质滞留于滤板上所造成的。致使柱的进口滤片处堵塞，压力升高。
2）霉菌生长
霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长，堵塞滤板，导致压力升高。这种现象在夏天，尤其是使用磷酸盐缓冲液为流动相时更易发生。在夏季使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。即使保存在冰箱中，一般也不要超过两天。否则，即使不堵塞滤板，也会因细菌或霉菌孳生而产生的代谢物造成对样品的干扰。
3）非特异性吸附
当溶质在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。
4）更换流动相时置换不彻底
致使流动相不互溶
5）盐晶体的析出
更换流动相后，缓冲液在新的流动相体系溶解度低而析出
6）样品的沉淀
配制样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中溶解度可能降低而析出
7）压力脉冲
运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。如，转动进样阀时动作过缓，造成液流堵塞再瞬间释放；开机瞬间压差较高等。压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化。填料微屑的长期累积可能会使柱床阻力增大。

3.寻找原因
综合分析后从在线过滤片阻塞和样品阻塞两方面考虑问题：
1）使用的流动相均经0.45μm滤膜过滤，整个系统柱前压为0.2MPa，判断在线过滤器没问题，问题不在于流动相。
2）单独接色谱柱（不接保护柱）柱压为3.8MPa(流动相100%甲醇)，单独接保护柱（不接色谱柱）柱压为1.8MPa(流动相100%甲醇)，正常情况下保护柱柱压极低，判断保护柱可能脏了，问题应该在于样品。

4.解决问题
1）清洗保护柱：将保护柱卸下后分别用稀酸——水——异丙醇——水超声清洗各15min。将清洗过的保护柱重新装上后，单独接保护柱（不接色谱柱）柱压为0.8MPa(流动相100%甲醇)，再装上色谱柱整个系统柱压为4.4MPa(流动相100%甲醇)，与开机前柱压大致相同。
2）样品取上清液后需经0.2μm滤膜过滤

5.工作总结
色谱柱是液相的核心部件，柱压升高在一定程度上可以我们使用过程中是一个信号，要即时发现并处理问题。在线过滤器用于免除流动相的影响，保护柱代替色谱柱捕集样品中的杂质，防护工作到位了，色谱柱的使用寿命也会延长。

精
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小卢

第3楼2009/09/21

来学习了！
占个沙发，要仔细研究一下！
“2.寻找原因
1）使用的流动相均经0.45μm滤膜过滤，整个系统柱前压为0.2MPa，判断在线过滤器没问题，问题不在于流动相。
2）单独接色谱柱（不接保护柱）柱压为3.8MPa(流动相100%甲醇)，单独接保护柱（不接色谱柱）柱压为1.8MPa(流动相100%甲醇)，正常情况下保护柱柱压极低，判断保护柱可能脏了，问题应该在于样品。”

以上，我认为流动相不干净更能照成对保护柱的损害！
如果是更换柱芯是保护柱，建议就换个新的柱芯，估计也不贵的，关键是清洗的效果也不会很好！

0

楚无伤

第4楼2009/09/21

一般来说
在有保护柱的情况下
基本脏的都是保护柱（不然还要它干嘛）

对于脏的柱子
首先是利用不同的流动相组分冲洗（拆下分析柱）
不行的话反冲（注意柱压！）
至于超声啥的不建议使用

其实有时候因为净化不完全
样品吸附在柱子中冲不出来造成的柱压飙升才让人抓狂

0

老多_小多

第5楼2009/09/21

楼主应该把你的故障，有几种可能性都分析下，充实一下作品

0

宁夏恋冰

第6楼2009/09/21

谢谢建议，已做修改！
emoc98311 发表:楼主应该把你的故障，有几种可能性都分析下，充实一下作品

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宁夏恋冰

第7楼2009/09/21

用不同的流动相冲洗不起作用，才用稀酸超声洗的，反冲也使用过了！超声洗对柱子也不好，实属没办法的办法了！
lyg1281 发表:一般来说
在有保护柱的情况下
基本脏的都是保护柱（不然还要它干嘛）

对于脏的柱子
首先是利用不同的流动相组分冲洗（拆下分析柱）
不行的话反冲（注意柱压！）
至于超声啥的不建议使用

其实有时候因为净化不完全
样品吸附在柱子中冲不出来造成的柱压飙升才让人抓狂

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iamquan

第8楼2009/09/21

来学习一下！
压力增大是否和流动相不纯有关啊？

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宁夏恋冰

第9楼2009/09/21

你的意思是否流动相不干净啊？流动相有时需要不同有机溶剂和水，必要时加盐的比例！
iamquan 发表:来学习一下！
压力增大是否和流动相不纯有关啊？

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huaibeijiayuan

第10楼2009/09/21

如果有当时操作时的故障图片贴上来就更好了，

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宁夏恋冰

第11楼2009/09/22

谢谢提议，下次写的时候加点图片！
huaibeijiayuan 发表:如果有当时操作时的故障图片贴上来就更好了，

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小卢

第12楼2009/09/22

纯文字的东西是很难写的，能把情况说出来，讲清楚就已经很好了。
当然，如果锦上添花就更好！
quan0107yan1025 发表:谢谢提议，下次写的时候加点图片！

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