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【第二届网络原创作品大赛】HPLC也会“感冒”？

tyys98

2009/12/27

液相色谱（LC）

【第二届网络原创作品大赛】HPLC也会“感冒”？
HPLC是我硕士期间的研究方向，到现在已经用过很多不同型号了，应该说比较熟悉吧，然而今天却遇到一件很蹊跷的现象，S老师的研究生小李向我抱怨说，前段时间用来分析氨基酸的实验条件出现问题，有两种成分分离不开了，尝试过很多调整，包括流动相的配比、梯度表的修改、长时间的淋洗平衡等等都无济于事，不知道问题出在哪里，万般无奈下甚至都想过要更换色谱柱重新建立条件。

我先调出了以往的结果，与最近的图谱进行了仔细比较，发现18种氨基酸中只有位于中部的苏氨酸和甘氨酸发生了重叠，其余成分的分离效果基本没有发生显著改变且重现性较好，这些现象基本可以排除输液泵以及切换阀工作性能不稳定的理由。问题出在哪里呢？从两种成分的化学结构来看，柱温度的的改变有可能会影响两者的相对位置，然而小李说柱温的设定并无差错，一直都是40度。这时我忽然想到了天气！这几天寒流过境，室内温度也随之下降，有可能会导致恒温柱箱中的实际温度受到影响。苏氨酸较甘氨酸分子量更大，对温度变化更敏感，降低温度会使保留时间延长，色谱峰后移并与甘氨酸重叠。如果是这样，我们把柱温箱的温度升高1度应该可以观察到效果，果然，在41度下两者有了明显的分离趋势，再作调整很快得到了满意的分离结果。

我经常对学生们讲，科学研究的对象是自然规律，有时候它好像很不听话，这时候需要我们仔细的观察和思考，然后通过试验向它发问，而它们的那些表现其实就是在向你回答，如果稍不留意就错过最佳的对话机会。例如这一次就是仪器通过图谱告诉我们：它“感冒了”需要保暖，很高兴我听明白了。然而下一次呢？
（本文曾发表在我的博客：http://tonic.blog.sohu.com/）[/center][/center]

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荷月

第1楼2009/12/27

有可能！

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k-14chen

第2楼2009/12/27

呵呵，这样也行？

0

tyys98

第3楼2009/12/27

不是可能，是真实的情况。
荷月(wuxinhe) 发表:有可能！

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柏坡

第4楼2009/12/27

楼主说的真不错，观察的很细致。

0

tyys98

第5楼2009/12/27

呵呵，没办法，穿的单薄，只好加点热。色谱柱恒温箱的种类很多，象岛津的属于比较大的，里边有风扇吹着，温度比较准确。安捷伦的比较紧凑，卡在金属的加热块上，靠传导和空气自然对流加热，可靠性稍差些。我们用的是天津一家公司的产品，独立的。室温变化不大的情况下，热量的产生和散失达到平衡，但是当室温变化较大时，箱内感应器的温度与实际柱温之间会发生微小的变化，这个变化平时并不明显，然而在这个实验中恰好影响了结果。
k-14chen(k-14chen) 发表:呵呵，这样也行？

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tyys98

第6楼2009/12/27

谢谢夸奖，这是为师应该做到的。
柏坡(hgycook) 发表:楼主说的真不错，观察的很细致。

0

qz

第7楼2009/12/28

谢谢分享！

0

daldinia

第8楼2009/12/28

又一位好老师！

0

tyys98

第9楼2009/12/28

是的，我的学生们都对我很尊重，我也很高兴能为他们解忧。
daldinia(daldinia) 发表:又一位好老师！

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samanthalas

第10楼2009/12/28

非常好的经验分享啊！尤其是您对科学探索的感悟。

0

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