楚无伤
第1楼2010/01/19
一、 维生素E检测的两种方法
目前,国内国际检测维生素E不外乎两种方法,而前一种方法为通用方法,下面简要的介绍一下这两种方法。
1. 皂化-HPLC法
试样皂化后,经有机相萃取,维生素E用HPLC分离,外标法定量。根据样品的不同,皂化处理以去除干扰,同时在处理的过程中要加入保护剂。皂化反应碱的浓度、用量、皂化反应的温度,因样品的不同而略微有变化。具体处理步骤可参见国标,此处就不在赘言。
2. 萃取-HPLC分流法
试样直接萃取,萃取液过滤后准备进样。此法HPLC的配置和传统的配置不一样,具体的配置方式是:配备两台高压泵、两个六通阀、两根柱子(一根为分析柱、另外一根为预柱,其组分与分析柱相同)。HPLC分析开始的时候,泵一、预柱、分析柱、检测器连接在一起(Figure 1,红线)。泵二直接排空(Figure 1,蓝线)
Figure 1 阀切换前
当分析的样品通过预柱后,左边的阀切换,此时泵一、预柱连接,然后排空(Figure 2,蓝线);泵二、分析柱、检测器连接在一起(Figure 2,红线)。分析完成后,HPLC自动切换到Figure 1的状态。
Figure2 阀切换后
楚无伤
第2楼2010/01/19
二、 两种方法的优缺点
1. 皂化-HPLC法
此法为国标方法,不管是婴幼儿奶粉还是复合预混料都是用的此方法。优点是通用性强,不管是哪种形态的维生素E都会皂化为同一种形态定量,针对的样品广泛,适合用于通用的检测方法(国标、行标等)。
缺点是皂化的“度”不好掌握,造成稳定性不是很好。而且维生素是有生物活性的组分,统一皂化后虽然能定量,但是不能反应形态组分的生物活性,对于实际生物效果的反映欠佳。拿维生素E举例而言,不同的形态组分其生物活性相差非常之大,皂化后定量是化学方面的,而不能反映出生物活性方面的“量”。
2. 萃取-HPLC分流法
此法为专属的方法,优点是不需要皂化,直接萃取,稳定性良好,而且能够直接测定维生素E的不同形态组分,完美的反映了最终的生物活性“量”。加之前处理过程简单,有效的节约了试剂和时间。
当然缺点也非常明显,其一是HPLC的配置复杂;其二是专属性强。专属性在此处有两个方面,一是针对不同的样品其萃取的试剂、过程不一样,相差非常大;二是标准物质定量的时候因为有不同的维生素E的组分,需要不同形态的维生素E标准品,造成了标准品的繁复。
楚无伤
第3楼2010/01/19
三、 HPLC分析新思路
此部分讨论一下方法二所体现出来的亮点。方法二前处理简单,几乎没有对样品进行多少纯化方面的处理,而这样“脏”的样品通过在HPLC上面的处理,达到了完美的纯化和分离的效果。
为了实现在HPLC上面纯化和分离,此法的HPLC多了一台泵、一个六通阀,当待检组分(维生素E)通过预柱后,阀一自动切换,此时泵一直接冲洗预柱,样品中“脏”的部分都保留在预柱上面。当待测组分在分析柱上面分离的时候,预柱被很好的冲洗干净。
此法和传统的HPLC法不一样之处在于,传统的HPLC方法都是增多前处理的步骤,尽量纯化样品,使得上机的样品干净,便于保护分析柱和保证分离的效果;此法是背道而行,前处理的步骤非常之简单,纯化样品的步骤放到HPLC上面进行,既节约了样品前处理的步骤和时间,又保证了分离的效果。在样品分离的时候同时进行预柱的清洗,节约了时间。