【求助】求替加环素及泰诺福韦质量标准

HPLC/MS/MS法测定药物替诺福韦

仪器与试剂
1、药品、试剂与仪器准备
受试制剂:富马酸替诺福韦酯胶囊，300mg/粒(以替诺福韦酯计)，国内制药有限公司生产，批号:050112。
参比制剂:替诺福韦酯片Viread@(进口)，300mg/片(以替诺福韦酯计)，美国GileadSCienCes公司生产，批号:FBK242；
替诺福韦对照品，含量为98.7％。由某药业有限责任公司提供；
内标物为马来酸恩替卡韦，含量99.5％，北京市典范科技有限责任公司提供；

甲醇和甲酸均为HPLC色谱纯，德国MerCk公司产品；
Agilent1100液相系统(包括G1311A型四元输液泵，Gl313A型自动进样器，Gl316A型柱温箱和G1379A型脱气机)，美国Agilent公司；API4000型三重四极杆串联质谱仪，配备电喷雾离子源(TurboIonspray)，美国AppliedBiosystems公司；数据采集使用Analyst1.4.1软件，美国AppliedBiosystems公司；
分析柱为DiamonsilC18柱，250mmx4.6film，5μLm(迪马公司)；预柱为C，保护柱，4mmx3.0mm，5μLm(美国Phenomenex公司)；CP225D型分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；ThermoBR4i型高速离心机(美国ThermoBR4i公司)；
H一101型多功能漩涡混合器(上海康禾光电仪器有限公司)；TurboVapLV蒸发仪(美国Caliper公司)

2 药物萃取
样品的处理
取100mlL萃取液，分别加入50L甲醇一水溶液(50:50)和50L内标溶液(200ng·mL)，混匀，加入200μL甲醇，涡流1min，放置5min，离心5min(1l000r·min)，取150μL上清液于10mL玻璃试管中，40℃空气流吹干，残留物加入150μL水溶解，涡流混合，吸取上清液20μL进样分析。

3 含量测定
3.1、色谱条件流动相为甲醇一0.3％甲酸溶液(40:60)，流速为0.6mL·min，进样量为20μL，柱温为35℃
3.2、质谱条件设定
离子源为电喷雾离子源(TurboIonspray)；源喷射电压为4500V；温度为450℃；离子源气体1(N，)压力为413.4kPa；离子源气体2(N2)压力为344.5kPa；气帘气体(N2)压力为68.9kPa；正离子方式检测；去簇电压(DP)为43V；扫描方式为多反应监测(MRM)，碰撞能量(CE)分别为35eV(替诺福韦)和25eV(思替卡韦)；用于定量分析的离子反应分别为m/z288一m/z176(替诺福韦)和m/z278一m/z152(恩替卡韦)；碰撞气压力为3psi；扫描时间为200ms在上述条件下测得替诺福韦和内标恩替卡韦的保留时间分别为4.28和4.12min，其色谱图参见标准图库。

4.标准曲线的制备
精密量取混合空白萃取液100μL，加入替诺福韦标准系列溶液50μL，配制成相当于替诺福韦浓度为1.00，2.50，8.00，20.0，80.0，200，500和1000ng·mL的样品，按“2样品处理”项下依法操作，每一浓度进行双样本分析，进样20μL，记录色谱图；以待测物浓度C为横坐标，待测物的峰面积与内标物的峰面积比值为纵坐标Y，用加权(W=1μL)最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线，Y=l.61×10C一1.50×10(r=0.9980)根据标准曲线替诺福韦在1.01000ng·mL浓度范围内线性良好，其最低定量浓度为1.0ng·mL

5.计算药物中替诺福韦酯含量
换算公式--------