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代谢产物的分离与纯化心得体会(大鼠篇)
代谢的概念
什么叫代谢,在这就不解释啦,大家应该都知道,我们主要做两个方面:大鼠与人。这个原创里面,讨论的是大鼠代谢产物的分离与纯化。
大鼠的介绍
大鼠我们用过的有两种(SPF级)SD大鼠和wistar大鼠,这两只大鼠的区别:
SD大鼠: 生长快,繁育性能好,大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。 该品系对性激素敏感,对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。
Wistar大鼠 :其被毛呈白色,特征为头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长。Wistar大鼠性情温顺,性周期稳定,早熟多产,平均每窝产自10只左右,生长发育快,乳腺癌发病率很低,对传染病抵抗力强。
个人觉得SD大鼠挺暴躁,很容易咬人的,Wistar大鼠比较好哦,乖乖鼠。
大鼠喂养
这个问题很关键,饲料控制不好,大鼠会超重地:一天喂2次,水应该给足,要不然会发生惨案的,垫料要3天换一次,要不然,会被熏坏的,消毒必须的,要不然出血热就会光顾你们实验室的,记得去年就在我们这发生啦,封楼2周呢,当时,我们爽坏啦,有时间玩嘛。
给药前准备
第一:大鼠禁食12小时,期间给以0.4%的盐水,为什么禁食呢,让其胃里的饲料代谢完,要不然对以后的分离工作有影响。
第二:给药剂量药换算好,要不然没有根据,发文章会有问题的。
大鼠给药
这个比较讲究,我们常用的方法是灌胃和腹腔给药,腹腔给药简单,扎一针就好啦,灌胃挺有讲究的,本人不才,学了半天才会,牺牲在我手中的大鼠有5只多,那叫一个惨啊。警告大家,在不会灌胃的情况下,千万别自以为是,要不然。。。
尿液富集
有些时候怕样品不稳定,发生变化(代谢产物在尿液中不稳定,个人经验),有三招来防止:
第一招:在收集瓶中加无水乙醇,个人觉得效果很好。
第二招:在收集瓶里加酸,PH=4为好。
第三招;冰水浴,个人觉得那个麻烦,但也有点效果。
尿液储存
放在冰箱里,冷藏,不易降解滴。
尿液处理
不同的样品处理不一样,我们这做过黄酮,生物碱之类的化合物,据我了解,这个生物碱不好做,黄酮挺好做的,我个人觉得有两种方法:大孔和萃取。大孔树脂,我们这用得D1O1比较多,本人首次用AB-8,觉得不错的,我热衷于大孔。萃取:必须加酸调节PH3,要不然萃不出来的。
样品的分离与纯化
呵呵,代谢产物分离。个人经验:进行大孔柱色谱以后,可以考虑进行凝胶柱色谱,内源性物质一般可以除去,非常好的方法,我记得凝胶下来我就分到一个纯的,哈哈,真爽啊。
由于代谢物极性过大,最好不用硅胶来分,要不然,死吸附严重,样品就这样浪费啦,呵呵,用ODS分离,最好。
最后补充,做代谢的,最好有液质联用,盲分容易浪费时间,浪费经费。下图为凝胶分的纯品