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【讨论】色谱峰拖尾

液相色谱(LC)

  • 我现在做一分子量3464等电点10.9的多肽。纯度测定方法是参考国内一家企业的方法。 色谱条件如下

    流速:1.0ml/分钟,上样量:40μl(0.5mg/ml浓度),柱温:50℃,检测波长:210nm,样品池温度:4℃,流动相A:硫酸铵水溶液,
    流动相B:乙腈溶液

    洗脱梯度见表

    时间(min)

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    71.5

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    70

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    样品主峰拖尾,对称因子1.6。目前我用的色谱柱式4.6*150mm,上样量20ug并不大,色谱柱也是新的,所以这些原因都可以排除。我怀疑是我们缓冲体系不对,我还是搞不懂缓冲盐在这里具体起什么作用?我今天在硫酸铵水溶液中加入10mM三乙胺没有得到改善,后增加至20mM拖尾一点都没改善。到底是什么问题呀?请各位帮忙啊。
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  • kqz793360

    第1楼2010/11/05

    怎么会这样啊?发上来的怎么那么多乱七八糟的东东啊

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  • tyrone

    第2楼2010/11/05

    你这么发东西我是看不懂,你问问别人吧。

    kqz793360(kqz793360) 发表:我现在做一分子量3464等电点10.9的多肽。纯度测定方法是参考国内一家企业的方法。 色谱条件如下

    流速:1.0ml/分钟,上样量:40μl(0.5mg/ml浓度),柱温:50℃,检测波长:210nm,样品池温度:4℃,流动相A:硫酸铵水溶液(50mM硫酸铵乙腈溶液

    洗脱梯度见表

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    A(%)

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    28.5

    样品主峰拖尾,对称因子1.6。目前我用的色谱柱式4.6*150mm,上样量20ug并不大,色谱柱也是新的,所以这些原因都可以排除。我怀疑是我们缓冲体系不对,我还是搞不懂缓冲盐在这里具体起什么作用?我今天在硫酸铵水溶液中加入10mM三乙胺没有得到改善,后增加至20mM拖尾一点都没改善。到底是什么问题呀?请各位帮忙啊。

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  • 瓜瓜

    第3楼2010/11/05

    所使用的柱型是否正确呢?我指的是填料.

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  • 有水有渝

    第4楼2010/11/05

    应助达人

    楼主你不是把程序代码都发上来了吧,都是腾讯与360搞出来的。内容显示有问题的时候,版友可以点“编辑”重新书写。

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  • 有水有渝

    第5楼2010/11/05

    应助达人

    jhylc1976:
    我觉得不管你的上样量20是否多了,但是进样量40是多了一点。你说加入缓冲溶液的作用,是为了防止目标物解离,让色谱峰更加对称。
    (xky0230699转载)

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  • 〓猪哥哥〓

    第6楼2010/11/06

    应该不是填料的问题

    瓜瓜(dunedsy) 发表:所使用的柱型是否正确呢?我指的是填料.

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  • 〓猪哥哥〓

    第7楼2010/11/06

    国内企业测的成分也是你要分析的多肽?

    kqz793360(kqz793360) 发表:我现在做一分子量3464等电点10.9的多肽。纯度测定方法是参考国内一家企业的方法。 色谱条件如下

    流速:1.0ml/分钟,上样量:40μl(0.5mg/ml浓度),柱温:50℃,检测波长:210nm,样品池温度:4℃,流动相A:硫酸铵水溶液,
    流动相B:乙腈溶液

    洗脱梯度见表

    时间(min)

    A(%)

    B(%)

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    28.5

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    28.5

    样品主峰拖尾,对称因子1.6。目前我用的色谱柱式4.6*150mm,上样量20ug并不大,色谱柱也是新的,所以这些原因都可以排除。我怀疑是我们缓冲体系不对,我还是搞不懂缓冲盐在这里具体起什么作用?我今天在硫酸铵水溶液中加入10mM三乙胺没有得到改善,后增加至20mM拖尾一点都没改善。到底是什么问题呀?请各位帮忙啊。

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  • 〓猪哥哥〓

    第8楼2010/11/06

    不是出现拖尾就用三乙胺的。三乙胺是对碱性物质拖尾才有作用。

    流动相硫酸铵本身就是酸性的。加碱肯定没作用的。说不定加酸还会有作用。不过一定要注意的是色谱柱的允许的ph范围。

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  • kqz793360

    第9楼2010/11/08

    我的多肽就是碱性的,那应该是要加碱才能抑制拖尾呀。我流动相本身是酸性的是因为我要分析的多肽在酸性条件下稳定呀。

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  • 有水有渝

    第10楼2010/11/08

    应助达人

    可以更换色谱柱试试

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