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第2楼2010/12/05
1 仪器与试药
Shimadzu $$lc 2010A系列HP$$lc色谱仪,SPD-M10A VP D1ODE二极管阵列检测器,CLASS-VP5.X色谱工作站,UV-2401PC分光光度计。
盐酸氟桂利嗪对照品(郑州瑞康制药有限公司提供,非水滴定法测得含量为99.8%);盐酸氟桂利嗪胶囊(样I-V:市售品);不同厂家不同批号盐酸氟桂利嗪胶囊标示规格均为每粒含氟桂利嗪5mg;乙腈(色谱纯);其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱:Shimadzu Shim-park C18(5μm,4.6mm× 150mm);流动相:乙腈-水(320mL中加入十二烷基硫酸钠2.0 g和磷酸1.0mL)(68:32);流速:1.0 Ml/min;检测波长:254nm。上述色谱条件下,理论板数为7238,辅料无干扰。
3 线性关系的考察
3.1 对照品储备液的制备精密称取经105℃ 干燥至恒重的盐酸氟桂利嗪对照品12.5 mg,置50 mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。
3.2 标准曲线的绘制精密吸取对照品储备液1,3,5,7,9mL,分别置25mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积A与浓度C绘制标准曲线,计算得回归方程:A=4.897×10000C+1.27×10000r=0.9999在10~90μg/mL 浓度范围内呈良好线性。
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第3楼2010/12/05
4 回收率试验
按加样回收试验方法,精密称取已测知含量的盐酸氟桂利嗪胶囊内容物适量(约相当于盐酸氟桂利嗪12.5mg),分别精密加入经105℃干燥至恒重的盐酸氟桂利嗪对照品约10,12,15mg,置100mL的量瓶中,加流动相适量超声溶解并稀释至刻度,摇匀。过滤,精密量取续滤液5mL,置25mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。按样品含量测定项下方法测定并计算回收率,结果平均回收率(n=3)分别为100.5%,90.0%,99.5%;RSD 为0.3%,0.8%,0.3% 。
5 样品测定
5.1 对照品溶液的制备取“3.1”项下对照品储备液5mL置25mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。
5.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物,混匀,精密称取适量(约相当于盐酸氟桂利嗪12.5 mg),置50mL量瓶中,加流动相适量超声溶解并稀释至刻度,摇匀。滤过,取续滤液备用。
5.3 含量测定精密量取供试品溶液5mL,置25mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。按上述色谱条件测定,记录色谱图,同法测定对照品溶液,按外标法以峰面积计算其含量。
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第5楼2010/12/05
8 讨论
8.1 检测波长的选择精密量取对照品溶液20μL注入液相色谱仪,通过二极管阵列检测器及紫外检测器,在190~800nm范围内进行光谱扫描,提取盐酸氟桂利嗪色谱峰的光谱图,在201,215,226,254,292nm处有最大吸收,由于在254nm波长处色谱峰的峰型及响应值均较佳,既非末端吸收又具较高的检测灵敏度,故选择254nm作为检测波长。
8.2 流动相的选择筛选了甲醇-水、甲醇-醋酸溶液、乙腈-柠檬酸溶液及乙腈-十二烷基硫酸钠溶液等几种流动相,发现有的没有色谱峰,有的色谱峰保留时间较长,未知杂质色谱峰几乎无保留,而用乙腈-十二烷基硫酸钠溶液为流动相后,其保留时间及峰型均得到了改善,提高了分析效率。
8.3 列出了全国部分企业该品种含量测定的结果,按中国药典2000年版二部的紫外分光光度法测定,均符合规定,而采用拟定的HPLC法测定,发现个别样品的含量两种方法测定结果相差达41%,属不合格产品。从该样品的色谱图中发现,除盐酸氟桂利嗪色谱峰外,另有一较强未知物的色谱峰。由此可见,本文所建立的HPLC法能够更有效地控制产品质量,确保人们的用药安全有效,且操作简便,精密度好,结果准确。