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【第三届原创大赛】一次样本前处理的的过程

  • 职业游民
    2010/12/30
  • 私聊

前处理综合讨论

  • 维权声明:本文为012304原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的,均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。

    本文是一次动物源食品中残留级检测的样本前处理的过程,本文涵盖了整个过程,以及过程中的很多注意事项,并提带一些相关处理设备和技术,由于准备的不是很充分,所以部分图片没有做收集,总结本文一方面希望对大家能有一定的启发,同时也希望大家多多提意见完善本过程;


    样本前处理的概念在《样本前处理概述》一文中有较为详细的讲述,本处仅对样本前处理的过程做出讲解

    一、样本准备

    1、样本预处理
    一般的样本不是可以直接开始实验操作的,还有一个样本粉碎或匀浆的过程

    A 需匀浆的样本
    新鲜的肉类、熟食等一般含水量较大的样本固体块状样本需要该项处理,冻存的样本要先解冻再行处理。首先,将其切为小块或小片,然后放入匀浆机匀浆,一般以匀到呈糊状为止,器具按照“样本污染的防止处理”进行处理以后再行下一个样本的处理,处理完的样本要进行编号以后分包保存,

    B 需粉碎的样本
    如饲料、干燥蔬菜等干燥固态块状或颗粒状样本应进行粉碎处理,如果颗粒或块状样本尺寸太大时,预先用锤子等将其敲碎,再用匀浆机或粉碎机将样本处理至粉状,器具按照“样本污染的防止处理”进行处理以后再行下一个样本的处理

    C 不需要处理的样本
    如牛奶、蜂蜜、尿样等不需要进行该项处理。部分尿样在保存前可以进行离心去杂处理,但是不是必须要求

    D 特殊样本的处理
    对于某些非常特殊的样本会针对它进行较为特殊的处理,如毛发在剁碎以后经过研钵研细后保存,又如葡萄干,我们可以用定量的比例加水使它发涨软化以后更容易进行匀浆处理等

    2、样本编号以及登记
    预处理完的样本需要有一个有规律、唯一的编号;一般的编号规则如下
    A 采集于多个点的样本必须分别编号
    B 单个分量大于2KG的样本可分别编号
    C 不同种类的样本必须分别编号
    D 不同批次的样本必须分别编号
    E 样本的编号应该涵盖采购时间、采购地点、样本种类等相关信息,一般附带编号规则(本处不再敷述)

    登记的要求
    登记主要的目的是满足库存管理以及溯源的要求


    鸡大胸


    3、样本储存(略)

    二,样本前处理操作(以肉类为例子)

    A,各种溶液配制
    在实验开始前按照实验的要求或设计方案要求,配制出各种实验中需要的溶液,实验室现有的的溶液也应考虑溶液的配制日期以及有效期,过期的溶液按照本组制定的《溶剂/溶液的管理办法》进行处理。不是很特别要求情况下不要再实验的过程中配制溶液;

    B,样本称量/量取前的处理
    有的样本的是冷冻保存,有的样本在较低温度时粘度较大在样本且变得不均一,它们称量/量取前必须解冻或加热,夏天采用放置室内解冻即可,冬天可以是防水的温水浴解冻,或24/37度温箱解冻,也可以采用暖气片解冻,但是无论是什么样的方式在解冻完成以后必须立即转到室温环境中来,以免变质,值得一提的是某些药物的实验样本的解冻方式必须使用室温解冻,其他的解冻方式均对结果都有很大的影响



    图片中显示的是匀浆后并解冻的袋装鸡肉和虾肉

    C,样本称量/量取
    按照说明书规定的量进行称量/量取,对于外来复核的样本称量/量取应更加的精确,当称量的量很少的情况下可由一般的天平转到分析天平去称量,天平也要按时进行校正,部分样本采用量取的方式取样,在量取前必须保证量取容器的准确行;以保证样本量准确


    天平是实验室必须配备的工具之一


    样本称量过程中

    D,高标添加
    有相当多的实验都要进行添加回收,添加时要考虑试剂盒对于该样本的检测限,相关添加浓度可参照检测方法的参数或开发方法的目标参数。我实验室一般情况下添加是在提取液加入前完成,仅仅有极少部分实验是在提取加入后完成;

    E,样本提取液加入
    按照说明书给定的量和试剂/溶液的种类加入到样本中,量少的情况下可以用移液器进行转移,当需要的试剂/溶液量较大的情况下必须用移液管装以。(目前已经有了一些自动化的加液设备,最普通的即使瓶口分液器

    提取试剂和待加入提取试剂的样本

    F,震/振摇
    该步骤有两种方式,一种为长时间的使用震荡器上震荡,该方法可定时定量,但对于某些实验不适用,另一种为较强烈的振荡,可用涡动仪强烈涡动,也可以人为的上下振荡。不同的实验对时间的要求也不同,要按照要求进行


    震荡前的样本状态


    震荡以后的效果图

    震荡的目的就是为了有一个比较好的提取效果,震荡的过程使组织样本得到充分的分散开来,同时试剂的不断流行性提取交换,也使提取效果更上一层楼
    目前的这个步骤可以使用振荡器代替人工的过程,也有一些用超声提取的方法
    最为前端的就是均质器均质并加以超声细胞破碎;

    G,离心
    离心有三个影响因素,即为离心力、时间、温度,需要设定的参数就是三个参数,具体的设定方式因离心机不同而有一定的差异,没有条件的情况下要保证时间和离心机转度。



    离心前要注意这个看这个东西


    离心前



    离心后


    分层还是相当明显的,不过不是所有的离心过程都能得到如此好的分离效果,尤其是试剂与样本中的某些成分相近时比较容易乳化现象,即亮相之间出现乳状,这种乳状对残留级分析的影响是比较大的;所以要避免,一旦发生应做好处理,本人总结了几点
    a 超声法:将乳化的样本连同离心管或玻璃试管放入超声仪中超超声,已达到破坏乳化的效果
    b 冷冻法:将乳化的样本连同离心管或玻璃试管放入-20度使水相固化已达到破换乳化的效果
    c 加热法:一般将乳化的样本连同离心管或玻璃试管放入6080度的热水中已达到破坏乳化的效果
    d 搅拌法:用固体如移液器吸头、试管刷等将乳化层轻轻搅拌片刻,直接将已经破坏的有机相或水相吸出,或者再次离心以后吸取有机相或水相
    e 高速离心法:通过高速离心的方法达到破坏乳化的效果

    H,取液
    取液的过程也是比较复杂的,有很多种情况
    1)取上层
    这是最为常见和最简单的取液方式,仅仅需要按量取就可以
    2 取中间层
    最不常见的取液方式,一般情况下是去掉全部上层再吸取中间层,对于一些经验较为丰富的实验员在处理部分实验时可以直接突破上层取中间层
    3 取下层
    较为常见的取样方式,也是像取中间那样进行,值得注意的是,所有取液方式都有可能遇到取液时液体的量越取越体积越大,甚至吸到移液器内,对于这样的情况在取液时注意看液体的体积达到量就不继续吸就可以了



    分别取样,分别装,编号不能错了



    开来这个分离的效果还是很好的(1ml

    I,吹干浓缩
    吹干的三个影响因素为气体、温度、加热方式
    1 气体:较为理想的吹干气体为氮气,出于成本问题,一般采用空气吹干,
    2 温度:根据药物与提取溶剂的物理性质选择一个合适的温度,一般在5060度之间
    3 加热方式:一般有两种方式,分为水浴方式和干浴



    一个水浴方式加热的氮吹仪

    G,复溶
    吹干以后加入复溶液将药物溶解出来的过程,加速溶解的方式可为涡动溶解和超声溶解,时间时情况而定,一般仅使用涡动溶解



    涡动过程中液体在试管内快速旋转

    L,样本检测
    这是一个酶联免疫吸附法测定样本的过程



    需要的东西都齐了



    在这里面孵育



    酶标仪测定数据

    三,样本的二次处理
    当检测结果不可靠或需要更多的数据证明使,需要重复的时,需要做再次的处理,对样本也是有要求的,二次取样必须在样本没有发生明显变质之前进行,具体的方法与第一次处理相同,有时可以加入另外的方法同时进行处理以对照分析的结果

    四,污染和干扰分析
    污染:
    A,样品在搬运和贮存在实验室期间,必须相互分开,也要与其他潜在的污染源分开。这对表面或灰尘残留,或含容易挥发分析物的样品尤其重要。如果已知或认为样品中有这类残留,应用聚乙烯袋双层密封,并单独搬运和处理。
    B,为了对害虫进行控制或预防,实验室必须限制仅使用不用作残留的农药。
    C,对容量设备,如烧瓶、吸管和注射器必须仔细地清洗,尤其是重复使用时。对标准和样品萃取物应尽可能配置单独的玻璃器皿等,以避免交叉污染。应避免使用严重划伤的或腐蚀的玻璃器皿。应检查残留分析用的溶剂,以保证其未被分析物污染。
    D,在采用内标时,必应避免萃取物或分析物溶液对内标不必要的污染,反之亦然。
    E,在分析物自然存在于或由样品所产生时,使用药物产生的低水平残留不能与自然水平的区分开。在解释结果时,必须考虑到这些分析物的自然存在。如在某些动物体内在特定时间里某些激素含量很高,因此应避免这些污染源。

    干扰
    A应将设备、容器、溶液(包括水)、试剂、过滤设备等作为可能的干扰源进行检查。橡胶和塑料类(如密封物、保护手套和洗瓶)是常见的干扰源。应用)*+,条密封玻璃瓶。萃取物不应与密封物接触,尤其是在扎孔之后,应将玻璃瓶垂直放置。如果有必要再次分析萃取物,扎孔后必须赶快替换玻璃瓶密封物。试剂空白分析应确定所用设备或材料的干扰源。
    B样品自然成分的干扰是经常性的,干扰对所用测定系统是罕见的,其存在和强度是变化的,并且实质是敏感的。如果干扰的形式是与分析物的响应重叠,可要求另一个清洗或测定系统。如果干扰的形式是抑制或增强检测系统的响应,应予以基质匹配

    五、总结

    样本前处理在任何行业都有,不过具体的操作有所不同;本文提及仅仅是冰山一角;样本前处理的过程对最终的检测结果影响非常的大;更具不确定性,操作步骤越多的前处理方法,对结果的影响就越大(不确定计算的时候前处理影响很大);所以在尽量选择简单(步骤少)前处理方法的同时,更加要主要做好每个细节的操作;

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  • 快乐

    第1楼2010/12/30

    应助达人

    楼主分享一下“样本污染的防止处理”

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  • sunmei

    第2楼2010/12/30

    请问楼主:你们用的匀浆机是哪家生产的?价格多少?谢谢!

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  • 〓猪哥哥〓

    第3楼2010/12/30

    楼主原创非常详细。
    想问下,用塑料瓶做的称量比样品重量大,称样量能否有保证?

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  • 冷冷的冰雨

    第4楼2010/12/30

    楼主的资料很详细啊!图文并茂

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  • 职业游民

    第5楼2010/12/30

    其实我们实验室所谓的匀浆机不过是日常用到的而已,我们的是九阳的多功能豆浆机;附带了绞肉功能的那个

    sunmei(sunmei) 发表:请问楼主:你们用的匀浆机是哪家生产的?价格多少?谢谢!

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  • 职业游民

    第6楼2010/12/30

    这个问题主要与天平的示值误差有关,质量好一些的百分之一天平在称量范围内的示值误差基本小于0.01g的,
    这个基本上不影响称量,不过要书去皮的重量大于最大允许值的时候就不能这样做了;

    〓小猪猪〓(03yx2) 发表:楼主原创非常详细。
    想问下,用塑料瓶做的称量比样品重量大,称样量能否有保证?

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  • 平凡人

    第7楼2010/12/30

    很完善的前处理过程,楼主描述很详细。感觉天平的精度不是很高啊。

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  • AK-47(冲)

    第8楼2010/12/30

    很详细的表述,谢谢LZ分享,辛苦了。

    不过天平的精度是不是差了点?

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  • 魅力星光

    第9楼2010/12/30

    很详细!我也觉得天平误差会不会太大!
    数据保留几位?

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  • huacai

    第10楼2010/12/30

    我一直想测香梨中某成份,苦于不知该怎么前处理呢,这下了解了谢LZ分享

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