[第四届原创参赛]沙门氏菌比对实验

1.2 实验步骤
1.2.1 前增菌
无菌操作将样品（编号：3）（以下简称：样品）移取1mL接种到225mLBPW 的锥形瓶中，摇匀，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。剩余的样品放入4℃冰箱中以备必要时复查。
1.2.2 增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养18 h～24h；同时，另移取1 mL，转种于10 mL SC 内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
1.2.3 分离
分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于BS 琼脂平板和科玛嘉显色培养基平板，BS 琼脂平板于36℃±1℃培养40 h～48 h；科玛嘉显色培养基平板于36℃±1℃培养18 h～24 h。
平板上的菌落特征：在BS 琼脂平板上菌落呈黑色有金属光泽，菌落周围呈棕黑色。在科玛嘉显色培养基平板上菌落呈紫红色、蓝色。
从菌落特征上可初步判断，样品含有沙门氏菌属可疑菌落。
1.2.4 生化试验
分别从SC、TTB增菌液挑取进行划线分离的科玛嘉显色培养基上各挑取3个典型的较大的紫红色菌落接种TSI琼脂，接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂（NA）平板。同时接种蛋白胨水 （靛基质试验）、尿素琼脂 （pH7.2）、氰化钾 （KCN） 、甘露醇、山梨醇、ONPG，接种完毕，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。已挑取菌落的平板及纯化的NA平板储存于4℃冰箱中，以备必要时复查。
生化反应结果： 三糖铁琼脂底层产酸、斜面产碱、产气、产H2S；赖氨酸脱羧酶（+）、靛基质（-）、pH7.2尿素（-）、 KCN（-） 、甘露醇（+）、山梨醇（+）、ONPG（-）。注：（+）表阳性，（-）表阴性。
1.2.5 革兰氏染色实验
挑取显色平板上的菌落进行革兰氏染色，为革兰氏阴性短杆菌。
1.2.6 血清学鉴定
1.2.6.1 多价菌体抗原（O）鉴定
在玻片上划出2个约1cm×2cm 的区域，从TSI斜面上挑取1 环待测菌，各放1/2 环于玻片上的每一区域上部，一个区域下部加1 滴多价菌体（O）抗血清，另一区域下部加1 滴生理盐水，作为对照。用无菌的接种环分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。
结果：样品与 A-F群O多价血清混合物试验凝集，而在盐水对照中不凝集。呈阳性反应。
1.2.6.2 多价鞭毛抗原（H）鉴定
操作同1.2.6.1。
结果：样品与H因子血清i混合物试验凝集，而在盐水对照中不凝集。呈阳性反应。

1 结果与分析

（1） 进行分离培养时，采用传统培养基（BS）与科玛嘉显色培养基同时进行。 在科玛嘉显色培养基上沙门氏菌目的菌显示了特殊的颜色：紫色，大肠菌群等干扰菌呈蓝色。在BS平板上呈黑色有金属光泽的菌落有可能是沙门氏菌属，也可能是大肠菌群等干扰菌。如果取BS平板上的菌落接种TSI琼脂，要取更多个菌落，大大增加了生化试验工作量，生化试验要取NA平板的菌落做，减少漏检的机会。因此选择科玛嘉显色培养基的较大的紫红色菌落来接种TSI琼脂和其他生化试验，大大减少了假阳性率。减少了生化试验工作量。

（2） 接种的6管TSI琼脂培养结果均为：底层产酸、斜面产碱、产气、产H₂S；赖氨酸脱羧酶阳性。视为可疑的沙门氏菌培养物，应进一步做生化和血清学试验。在TSI琼脂上斜面产碱、底层产碱的培养物或者斜面产酸、底层产酸、赖氨酸脱羧酶阴性的培养物可视为非沙门氏菌培养物而弃去。

（3）样品分离平板（科玛嘉显色培养基）上挑取的菌落进行革兰氏染色，为革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌属于革兰氏阴性杆菌。

（4）样品生化反应结果为沙门氏菌属的典型反应。进一步做血清学鉴定结果。

（5）样品血清学鉴定： A-F群O多价血清、H因子血清i凝集，呈阳性反应。判定为沙门氏菌属。

3 结论

（1）该样品（编号：3）检出沙门氏菌。

（2）由于实验条件所限，没有先进的检测仪器，只是采用传统的平板分离培养方法，操作烦琐，但以积极、认真的工作态度，借助于显色培养基的特异性高，目的菌能显示特殊的颜色，也可以获得满意结果。

[参考文献]

[1]中华人民共和国卫生部.食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验.

应助达人

支持原创作品

楼主一出手就是好几篇啊

这些是以前就写好的

应助达人

沙门氏菌，现在用试剂盒检测，可以吗？

支持原创作品

没有图片欠缺点什么似的，下回我来一个。呵呵