化学发光凝胶成像仪 |
操作流程: 1. 打开电脑; 2. 打开成像仪器电源(左后侧)和CCD 电源(黑色),将样品放入工作台; 3. 双击桌面上图标,打开Quantity One 软件,或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入; 4. 从File 下拉菜单栏中选择ChemiDoc XRS…,打开图像采集窗口; 5. Select Application 选择相关应用; aUV Transillumination 透射UV:针对DNA EB 胶或其他荧光,打开仪器面板上UV 按钮; bWhite Transillumination 透射白光:针对透光样品如蛋白凝胶,x-光片,把白光灯箱 放在UV工作台上,打开仪器面板上Trans-White; cWhite Epillumination 侧面白光:针对不透光样品或蛋白凝胶,打开仪器面板上Epi-White 6. 单击Live/Focus 按钮,激活实时调节功能,此功能有三个上下键按钮:IRIS(光圈),ZOOM(缩放),FOCUS(聚焦),您可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节,调节步骤: a调节IRIS 至合适大小 b点ZOOM,将胶适当放大 c调节FOCUS,至图像最清晰 7. 如果是DNA EB 胶或其他荧光或蛋白凝胶,单击Auto Expose,系统将自动选择曝光时间成像,如不满意,单击Manual Expose,并输入曝光时间(秒),图像满意后保存; 8. 如是化学发光,在Select Application 下选择Chemiluminescence 或Chemi Hi Sensitivity(如样品强度较弱),先打开Epi-White 侧面白光,同第5 步调节清楚膜的聚焦状态(如膜上没有可对焦的标记,可用记号笔做个小记号)。然后关闭光源,不打开任何光源,将滤光片位置换到o 位(仪器上方右侧),将光圈Iris 开到最大,选择Auto Expose 自动曝光,或输入ManualExpose 时间,可对化学发光的弱信号进行长时间积累如30min,或单击Live Acquire 进行多 桢图象实时采集,在对话框内定义曝光时间长短,采集几桢图象,在采集的多桢图象中选取满意的保存。 化学发光是特别弱的发光,所以曝光可以很长,记得做完化学发光后,把滤光片位置换到原先的位置(I 位)。 |
省部重点实验室
第1楼2012/04/29
基本的图像优化
1. 如图像采集时胶位置不正,软件可将图像进行任何角度的旋转,选择Image-Rotate-CustomRotate,进行旋转;
2. 一般图像拍下来周围都有一些区域是背景或是你不需要的,选择Image-Crop,Crop 工具能将图像进行剪切;
3. 调节对比度:选择Image-Transform, Transform 工具将图像调节到你喜欢的对比度(不改变原始数据,只是改变显示);
4. 加文字,箭头:Edit-Text Overlay Tools-Text Tools,在打开的窗口里输入文字(接受汉字),并可调节字体颜色大小;Edit-Text Overlay Tools-Line Tools,用鼠标在图像上划出直线,双击该直线可添加箭头,可调节箭头长短;
5. 满意后保存图像,或通过Video Print 热敏打印,或通过Print 喷墨或激光打印。
6. 如需要将图象文件输出用到Photoshop 等图象处理软件,从File-Export-Export to Tiff Image,将文件存成tiff 格式或Export to Jpeg Image,存成jpg 格式。
提到凝胶成像系统,就一定要强调有关EB的使用。EB(Ethidium bromide,溴化乙锭)
一种高度灵敏的荧光染色剂,帮助我们对琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA进行观察。
溴化乙锭的损害
1.溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。
2.溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!
废弃溴化乙锭EB的处理
1.接触时必戴上手套,严禁随便丢弃,废EB接触物,如抹布,枪头,一般回收至黑色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理。
2.对于含EB的电泳胶:胶里EB的含量小于0.1%可以直接扔掉。大于等于0.1%时应该放在生物危害柜中焚烧掉。
3.废 EB溶液的处理方法
(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理:
a.将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml;
b.加入一倍体积的0.5mol/LKMnO4,混匀,再加入等量的25mol/LHCl,混匀,置室温数小时;
c.加入一倍体积的2.5mol/LNaOH,混匀并废弃。
(2)EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理:
a.按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
b.用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
目前GoldView核酸染料是EB的良好替代产品,既能与DNA结合,又有强荧光发射,又无毒,无害,不致癌。