经过色谱柱后荧光信号大大降低，为什么？

溶液稳定吗？

应助达人

不接色谱柱可能是所有信号集中出现，过了色谱柱就是分开了，不然就是色谱柱吸附，方法是成熟的标准方法吗？

溶液是磷酸盐缓冲液和乙腈，应该很稳定
方法也是老方法了，2年前还做过，当时灵敏度够，也就没拆柱子试验，不知道当时是不是也有这种情况。
但现在灵敏度不达标了，也不知道该咋办。
色谱柱的填料会造成荧光淬灭吗？查了好多文献，没发现有这种提法的。

应助达人

把以前的图谱调出来看一下就知道了，同时检查一下灯的能量值，最好能做一个荧光扫描。

首先楼主不是衍生的吧？如果是衍生的一般试剂实际过量，经过色谱柱分离后过量的衍生实试剂分来了，所以峰就小了。如果楼主不是衍生的，那么经过色谱柱和没经过色谱的液相条件是不一样的（有机相的比例变了），荧光强度与溶剂也有关系奥，刚走了个样，改变梯度提前2分钟，灵敏度就下降一半。

或许荧光强度与流动相的比例有关系，我再试试看，多谢了