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生物内样品预处理

wzdlhh

2013/07/24
x射线仪器

前处理综合讨论

生物内样品预处理

生物样品成分复杂，往往含有大量有机物、无机物及各种矿物质元素，在对目标成分进行分析检测时，首先要排除内源性杂质及代谢物的干扰，又要对目标成分进行富集纯化以满足仪器检测灵敏度的要求。在处理的过程中，还要密切关注目标成分的理化性质，如失活，空气氧化，蛋白水解等，生物样品的提取制备繁琐复杂，下面我们对一些常规的预处理方法进行归类总结。

1.样品均匀化

样品均匀化可采用物理方法和化学方法。简单总结如下：

2.去蛋白处理

蛋白质的存在常常干扰生物样品中一些小分子化合物的检测。在色谱分析中，蛋白质的存在有可能会堵塞色谱柱，导致柱压升高，影响柱效，对仪器产生较大损伤。去除蛋白质的方法主要有：

2.1 加入与水混溶的有机溶剂

对于生物样品中极性成分，可加入极性有机溶剂甲醇、乙腈、乙醇、丙酮等，它们能与水互溶，使样品中的蛋白质脱水沉淀。按体积比1:2加入过量极性有机溶剂，离心，可沉淀98%的蛋白质。

优点：蛋白脱水生成沉淀，通过离心即可除去，操作简便；若样品用于反相高效液相色谱法进行分析，上清液与流动相相匹配。

局限性：但凡能溶于水-醇系统的物质，均在上清液中被提取出来，对于目标成分并没有很好的分离，上清液由于加液量多，难于挥干浓缩，残留的微量蛋白有可能会引起色谱柱堵塞。

2.2加入酸性沉淀剂

酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成不溶性盐。加酸性沉淀剂10%三氯醋酸、6%高氯酸钼、钼酸、磷钨酸、苦味酸等，调节溶液的pH值低于蛋白的等电点，使蛋白形成白色沉淀，加热使淀完全，离心，得上清液。

优点：沉淀作用强，0.2体积即达99.7%的沉淀率。

局限性：上清液须用乙醚等萃取，萃取剂可能对目标成分产生干扰。

2.3加入无机盐类

无机盐类可以使蛋白质胶体脱水并中和其电荷而沉淀。常用无机盐类：饱和硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

局限性：沉淀率较低。

2.4加入重金属盐类

重金属盐类如汞盐、铜盐、锌盐等可与蛋白质形成不溶性盐而沉淀

2.5其它非化学方法

可用平衡透析法、超滤法去除大分子蛋白。液液萃取或液固萃取在萃取药物的同时，直接去蛋白。

3.冷冻干燥

冷冻干燥是生物预处理的有效方法，主要适用于水溶性较强的生物样品。将生物样品置于液氮、冰-丙酮浴或-40℃冰箱等低温条件下冷冻，冷冻好的样品放入冻干机中减压干燥，干燥的过程冰直接升华为水蒸气，其它杂质也一并挥发掉

。

4.结合物水解

药物在代谢后形成的葡萄苷酸、硫酸酯等结合物，使药物无法以游离状态存在，若要检测药物离子浓度，则需要通过酸水解、酶水解、溶剂解等方式。

5.贮存

预处理好的生物样品如在短期（如日内）即行分析的样品，置于4℃冰箱冷藏；需放置数日或较短时日的：-20℃冷冻；长期贮存：-40℃~ -80℃。

分
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qq250083771

第1楼2013/07/24

应助达人

样品首先要均匀啊还有就是要看看测试啥吧

0

zhw19811005

第2楼2013/07/24

预处理好的样品还是尽快使用比较好

0

冰火女孩

第3楼2013/07/24

生物内样品是测药品的吗

0

透明

第4楼2013/07/25

怎么你的图片都是网上的啊

0

尘

第5楼2013/07/25

来点实例讲解更好

0

shitou840624

第6楼2013/07/30

这个没做过，看起来一定非常费时间，看以后有机会接触了再看了。

0

魅力星光

第7楼2013/07/31

能上实验图片就好了~

0

云☆飘☆逸

第8楼2013/08/01

应助达人

不太懂这个仪器

0

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