【许愿原创】样品测定与方法改进

样品测定与方法改进

简介

随着科技的发展和市场（消费者）的需求，现在食品的色、味、口感、保质期等很多指标都有很高的要求，这就需要食品加工公司在食品的生产和运输等环节对食品做一些特殊的处理。

人工合成色素就是现在食品中经常添加的一种。这种色素是一种化工合成产品，不像天然色素那样，经常食用或大量食用对身体有一定的危害，甚至会增加癌症病发率。

下面我们就介绍某种食品中几种人工合成色素的分离与测定。

实验部分

仪器

高效液相色谱仪，配紫外可见光检测器、二元高压洗脱装置（二元高压泵）、柱温箱、脱气机

超声波清洗器

溶剂过滤器

试剂

0.02mol/L乙酸胺

甲醇：色谱纯

超纯水

柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝标准液

柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝标准系列混合液

色谱条件:

检测器: 紫外-可见光检测器

波长：254nm

色谱柱:Venusil XBP C18 （4.6 X 250mm,5ul）色谱柱

S/N:V9520525CK0043

流动相:A) 甲醇

B) 0.02mol/L乙酸铵

梯度表:

流速: 1.0ml/min

温度: 30°C

进样量: 20 μl

标准品色谱图：

1. 柠檬黄

2. 苋菜红

3. 胭脂红

4. 日落黄

5. 亮蓝

样品1色谱图：

样品2色谱图：

样品3色谱图：



下面就介绍下多种化合物同时检测波长选择的问题。

每种化合物都有多个吸光（紫外吸收）波长，我们用高效液相色谱法检测时，除要选择理想检测波长外同时还得考虑在此波长处有无吸光较强的杂质，相对标准偏差的可靠性等问题。当然在最大吸收波长处如果能满足检测那是最好的。

多种化合物同时检测难度要比单一化合物难一些，它得考虑每种化合物的灵敏度、分离度、重复性、线性等多种指标。下面我们就主要介绍多种化合物同时检测波长选择的问题，就拿柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝为例。

柠檬黄在254nm、428nm、448nm等处都有较强的紫外吸收，其中428nm处吸收最强；苋菜红在254nm、521nm等处有较强的紫外吸收，其中521nm处吸收最强；胭脂红在254nm、280nm、494nm、510nm等处都有较强的紫外吸收，其中494nm处吸收最强；日落黄在254nm、450nm、482nm等处都有较强的紫外吸收，其中482nm处吸收最强；亮蓝在254nm、627nm等处都有较强的紫外吸收，其中627nm处吸收最强。

大家可能已发现这几种化合物在254nm处都有较强的紫外吸收，如果检测器没有多波长检测功能，选择这个波长检测效果也是不错的。

柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄这几种化合物在最大吸收波长和在254nm处检测时差别不大，所以选择这个波长检测也有很好的效果。亮蓝就不一样了，在627nm处检测时它的信号强度一般都比在254nm处高几倍、十几倍，有时甚至会高二三十倍。所以同时检测这五种色素，前四种选择254nm，亮蓝选择627nm检测效果较好。

下面就看下谱图，比较下。



以上是5种化合物分别在254nm和最大吸收波长下检测的色谱图，信号强度有差别，前四中不太大，亮蓝非常明显。

下面再看看这5种化合物在254nm波长下检测的色谱图，和0-15min在254nm，15-30min在627nm检测的色谱图。


结果表明检测以上5种化合物，波长选择0-15min 254nm，15-30min 627nm效果较好。

注意事项：

1．检测多种化合物，分离度、灵敏度、重复性、线性、回收率、准确率等指标都得兼顾。

2．检测使用的检测器有多波长功能才能选择这种方法。

3．化合物在不同波长下响应值有非常明显的差别，选择该种方法，因为如果响应值不太明显，选择该方法对分析结果影响不大，方法却复杂了。

4．波长转换的不要太频繁（同一次检测波长不要选择的太多），太频繁了基线可能不太稳定，还可能有其它问题影响检测结果。

5．因为每台检测器波长准确度都有误差，所以最大吸收波长在每台检测器上不一定都是最理想的，检测时最好是进行下波长扫描，确定下。

6．每种样品在不同流动相下的响应值是不同的（信噪比不一样），所以对样品进行波长扫描，得到的最大吸收波长，在实验中不一定是最理想的。

7．光电二极管阵列检测器同时检测多种化合物，效果最好，因为每种化合物都可以找到最佳的检测波长和检测结果。

8．采用多通道紫外可见光检测器，同时检测多种化合物，通过选择不同的检测通道可以得到较好的效果。

9．同一样品在相同的方法下（改变波长的方法），得到的结果不一定相同，因为每台仪器灯能量在每个波长下不一定相同，这样改变波长样品在不同波长下的响应值的变化程度（变化的倍数）就不一定相同。

实验前一定得先分析下样品和实验室的具体情况，一定得立足现状，对实验方法适当优化。结果的准确、可靠是第一位的，切不可为了追求某一指标而影响其它指标，影响分析结果。

以上方法仅供参考，希望能帮到大家。