仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >食品检测 > 乳制品检测 > 帖子详情

乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法

童话仙子

2014/10/26

乳制品检测

乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验方法

杯碟法

1、范围

本标准规定了乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物的检验方法。

本标准适用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类物质的检验。

本方法的检出限为4U/mL。

2、原理

该方法采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株，利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性，并加入青霉素作为对照，通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑制圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物。

3、设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

3.1 抑菌圈测量仪或测量尺。

3.2恒温培养箱：36℃±1℃。

3.3 高压灭菌器。

3.4 无菌培养皿:内径90 mm，底部平整光滑的玻璃皿，具陶瓦盖。

3.5 无菌牛津杯：外径(8.0士0.1) mm，内径(6.0士0.1) mm，高度(10.0士0.1) mm。

3.6 麦氏比浊仪或标准比浊管。

3.7 pH计。

3.8 无菌吸管：1mL（0.01mL刻度值），10mL（0.1mL刻度值）。

3.9 加样器:5μL～20μL，20μL -200μL及配套吸头。

4、培养基和试剂　

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的三级水。

4.1 试验菌种：藤黄微球菌(Micrococcus luteus) CMCC(B) 28001，传代次数不得超过14次。

4.2 磷酸盐缓冲溶液：按附录A中A.1规定。

4.3生理盐水（8.5 g/L）：按附录A中A.2规定。

4.4 青霉素标准溶液：按附录A中A.3规定。

4.5 β-内酰胺酶标准溶液：按附录A中A.4规定。

4.6 舒巴坦标准溶液按附录A中A.5规定。。

4.7 营养琼脂培养基：按附录A中A.6规定。

4.8 抗生素检测用培养基Ⅱ：按附录A中A.7规定。

5、操作步骤

5.1 菌悬液的制备

将藤黄微球菌接种于营养琼脂斜面上，经36士1℃培养18h-24 h，用生理盐水洗下菌苔即为菌悬液，测定菌悬液浓度，终浓度应大于1×1010 CFU/mL，4 ℃保存，贮存期限2周。

5.2 样品的制备

将待检样品充分混匀，取1 mL待检样品于1.5 mL离心管中共4管，分别标为：A、B、C、D，每个样品做三个平行，共12 管，同时每次检验应取纯水1 mL加入到1.5 mL离心管中作为对照。如样品为乳粉，则将乳粉按1:10的比例稀释。如样品为酸性乳制品，应调节pH值至6-7。

5.3 检验用平板的制备

取90mm灭菌玻璃培养皿，底层加10 mL灭菌的抗生素检测用培养基Ⅱ,凝固后上层加入5 mL含有浓度为1×108 CFU/mL藤黄微球菌的抗生素检测用培养基Ⅱ,凝固后备用。

5.4 样品的测定

按照下列顺序分别将青霉素标准溶液、β-内酰胺酶标准溶液、舒巴坦标准溶液加入到样品及纯水中：

A 青霉素5 μL。

B 舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。

C β-内酰胺酶25 μL、青霉素G5 μL。

D β-内酰胺酶25 μL、舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。

混匀后，将上述A～D 试样各200 μL 加入放置于检验用平板上的4个无菌牛津杯中，36士1℃培养培养18～22 h ，测量抑菌圈直径。每个样品，取三次平行试验平均值。

5.5 结果报告

纯水样品结果应为：（A）、（B）、（D）均应产生抑菌圈；（A）的抑菌圈与（B）的抑菌圈相比，差异在3 mm以内(含3 mm)，且重复性良好；（C）的抑菌圈小于（D）的抑菌圈，差异在3 mm以上(含3 mm)，且重复性良好。如为此结果，则系统成立，可对样品结果进行如下判定：

7.1 如果样品结果中（B）和、（D）均产生抑菌圈，且（C）与（D）抑菌圈差异在3 mm以上（含3 mm）时，可按7.1.1、7.1.2 判定结果。

7.1.1（A）的抑菌圈小于（B）的抑菌圈差异在3 mm以上(含3 mm),且重复性良好，应判定该试样添加有β- 内酰胺酶，报告β- 内酰胺酶类药物检验结果阳性。

7.1.2（A）的抑菌圈同（B）的抑菌圈差异小于3 mm，且重复性良好，应判定该试样未添加有β- 内酰胺酶，报告β- 内酰胺酶类药物检验结果阴性。

7.2 如果（A）和（B）均不产生抑菌圈，应将样品稀释后再进行检测。

分
该帖子已被版主-Franklin-学加3积分，加2经验;加分理由:好内容

相关话题

童话仙子

第1楼2014/10/26

详细检测请看版主原创

0

分
该帖子已被版主-yqfxy加1积分，加2经验;加分理由:参与

Franklin-学

第2楼2014/10/26

杯碟法的检测准确率有多高？

0

分
该帖子已被版主-yqfxy加1积分，加2经验;加分理由:参与

HSJT

第3楼2014/10/27

这个好像之前有人在版面上写过原创

0

分
该帖子已被版主-yqfxy加1积分，加2经验;加分理由:参与

英伦

第4楼2014/10/27

传说中的杯碟法

0

分
该帖子已被版主-yqfxy加1积分，加2经验;加分理由:参与

自营牧场

第5楼2014/10/27

上周才理解β内酰胺类和β内酰胺酶的区别

0

分
该帖子已被版主-yqfxy加1积分，加2经验;加分理由:参与

HSJT

第6楼2014/10/31

传说中的杯碟法

0

检测人生

第7楼2014/10/31

应该是β内酰胺酶

0

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...