高效液相色谱法测定促进消化片中熊果酸的含量
本所研制的促进消化片由山楂、麦芽、鸡内金、莱菔子等药味组成，具有清胃消食之功效。用于脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食、嗳腐酸臭、脘腹胀满；消化不良见上述证候者。其中君药为山楂。
中药山楂是蔷薇科山楂或山里红的干燥成熟果实。具有消食健脾，行气散瘀功效，用于肉食积滞，胃脘账满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，疝气作痛；高血脂症。主产山东、河北、河南、辽宁、山西等省，多为栽培。
随着中药现代化发展战略的提出，为控制产品质量，确保临床疗效，对中药的鉴别和检查提出了很高的要求。本文采用高效液相色谱法对方中山楂的有效成分熊果酸进行含量测定，为建立促进消化片的质量标准提供依据。
材料与方法
1 仪器与材料
安捷伦1200 配紫外检测器
循环水式真空泵（河南郑州）
旋转蒸发仪（东京理化）
紫外可见分光光度计（瓦里安）
SZ-97A自动三重水蒸馏器（上海亚荣生）
电子天平（万分之一，梅特勒托利多）
超声波清洗机（昆山）
熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所），促进消化片（本所自制），阴性对照（自制），甲醇（分析纯、色谱纯，国药）
2 方法
2.1 色谱条件色谱柱为依利特 (250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水：醋酸(65∶34：1)；检测波长210nm；体积流量1mL﹒min-1；柱温38℃；进样量20μl。理论塔板数按熊果酸峰计算，应不低于3000。
2.2 溶液的配制
2.2.1对照品贮备液的制备
精密称取于五氧化二磷干燥器中减压干燥24小时的熊果酸10.56mg，溶于适量甲醇，移至50mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1mL含熊果酸0.2112mg的溶液，作为熊果酸对照品贮备液。
2.2.2对照品溶液的制备
精密量取熊果酸对照品贮备液1mL置5mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1mL含熊果酸0.04224mg的溶液，作为熊果酸对照品溶液。
2.2.3供试品溶液的制备
取100片促进消化片粉碎过120目筛，精密量取粉末1g，甲醇超声提取30分钟，过滤，滤液水浴蒸干后，残渣加适量甲醇，超声处理30 min，转入50 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，以0.45μm滤膜滤过，即得。
2.2.4阴性对照液的制备
按处方比例及制备工艺，配制不含山楂的阴性对照品，并照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。
2.3 干扰试验
取供试品溶液，对照品溶液和阴性溶液各20μL，在上述色谱条件下进样、分析。
2.4 线性关系的考察
精密量取熊果酸对照品贮备液0.20ｍＬ，0.25ｍＬ，0.50ｍＬ，1.00ｍＬ，2.00ｍＬ，2.50ｍＬ分别置5ｍＬ容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成8.448μg﹒mL-1，10.56μg﹒mL-1，21.12μg﹒mL-1，42.24μg﹒mL-1，84.48μg﹒mL-1，102.6μg﹒mL-1的对照品溶液。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20μＬ，注入液相色谱仪，按样品的测定项下色谱条件进行测定，记录峰面积。以进样浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标进行线性回归。
2.5 精密度试验
精密吸取上述对照品溶液20μL，按上述色谱条件进行测定，连续重复进样5次。
2.6 稳定性试验
取上述对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10 h进行测定。
2.7 重复性试验
取5份同一批号供试品溶液按上述色谱条件进行测定。
2.8 加样回收率试验
取5份同一批号供试品10mL，分别精密加入一定量对照品，同供试品处理，按样品测定方法测定含量，计算回收率。
2.9 样品含量测定
取3批促进消化片，依法制备供试品溶液，分别取对照品溶液，供试品溶液20μL进样，测定峰面积，计算含量。
结 果
1、供试品溶液主峰的保留时间与对照品熊果酸主峰的保留时间一致，且阴性无干扰。
2、线性关系：其浓度在8.45～102.6μg﹒mL-1范围内线性关系良好.
3、精密度试验：熊果酸峰面积RSD＝0.3%（n=5），表明该法的精密度良好。
4、稳定性试验：对照品溶液峰面积积分值RSD＝2.0%(n=6)，供试品溶液峰面积积分值RSD＝2.5%(n=6)，表明熊果酸对照品及样品在10 h内稳定。
5、重复性试验：RSD＝2.2%(n=5)，表明该法重复性的良好。
6、加样回收率试验：平均回收率为99.13%，RSD为2.2%(n＝5)
7 、样品含量测定：促进消化片中熊果酸的平均含量4.63mg/1g.
讨 论
1、温度的选择:由于本品的药物组成多，成分复杂，不同成分受温度的影响不同，通过试验确定该实验的温度为38℃，以确保色谱的一致。
2、供试品的处理：熊果酸为一三萜皂苷类化合物，易溶于醇等有机溶剂，本试验选择甲醇为溶剂超声处理，提取供试品中的熊果酸。
3、本实验所建立的高效液相色谱法测定促进消化片中熊果酸的含量的方法，方法简单，结果准确，重现性好，可作为促进消化片质量控制方法。
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