2011~2014年本市流感病毒检测分析

材料和方法
一、标本来源
收集2011年4月—2014年4月间本市第一人民医院及本市一县人民医院门诊和病房收集的发热（体温≥38℃）伴咳嗽或咽痛的咽拭子标本，在4~8℃条件下保存，并在24小时内冷藏送至流感实验室，尽快分离接种，未能及时接种存-70℃保存。
二、试验方法
1、病毒分离与鉴定：标本经常规处理后，接种到生长状态良好的传代犬肾（MDCK）细胞，连续观察细胞病变，并进行血球凝集试验，对于血凝滴度小于1:16的毒株，将病毒培养液进行10-1—10-3稀释后进行传代。收获的病毒培养液用人O型红细胞进行血凝素（HA）试验，确定病毒滴度。然后采用国家流感中心的各型别/亚型标准参照血清进行血凝抑制（HI）试验，确定病毒的型别和亚型。
2、病毒Real-time one step RT-PCR检测
2、1使用ambion公司生产的Mag MAXTM—96Viral RNA Isolation Kit,按照病毒RNA提取试剂盒说明书提取标本中的病毒RNA。
2、2 PCR，按照AB公司的Ag Path—IDTM One—Step RT—PCR Kit 试剂盒说明书操作。扩增条件：45℃ 10分钟1个循环，95℃ 10分钟1个循环，95℃ 15秒钟，60℃ 45秒钟40个循环收集荧光。
三、结果
1、病毒分离结果 2011年1月至2013年12月本市共采集咽拭子标本2780份。分离和鉴定确认的流感病毒87株，病毒分离阳性率3.13%，其中H1N1亚型流感病毒16株，占18.39%，H3N2亚型5株，占5.75%，B型中yamagata系16株，占18.39%，B型中victoria系50株，占57.47%。

2、PCR检测结果 2011年1月至2013年12月本市共采集咽拭子标本2780份。PCR检测阳性标本337份，检测阳性率为12.12%。其中新甲H1亚型流感病毒112份，占33.23%，H3N2亚型89份，占26.41%，B型136份，占40.36%。2011~2013年流行期，以B型流感病毒占优势，H3N2亚型为弱势。

楼主还做这个实验了

最近我看北京的流感 挺严重的。看新闻说，

还是快点发现是怎么致病微生物 ！

是的，曾今做过。

那天我看着新闻上说了。

流感病毒的致病机制 已经基本清楚了。

说起北京的 流感的 那个 新闻我 也看到了。

看来关注的人还挺多的啊