求助~~~确定不了哪个是样品峰

低浓度下样品就没有完全分离，换更大的浓度没意义吧。你这个应该重新开发方法梯度，先让样品中三个峰能完全分离，再去确定物质。

应助达人

先用一个中高洗脱能力的等度试试看，比如用100%乙腈做流动相，用100%乙腈溶解标准物质（多少会溶解一点的）

应助达人

找了一篇文献，可以参考一下里面的分析方法

应助达人

第一张图中5min出的峰不是待测物质吗？不同浓度下，能否找到对应的峰成比例呢

应助达人

楼主的方法来源哪里，比较奇怪，反相柱用正相洗脱体系？如果原有方法不是标准方法，建议先参考“3_5_二叔丁基_4_羟基苯甲酸高效液相分析方法的建立”

我用乙腈当溶剂试过，在乙腈中可以溶解，出来的峰前两个还是分不开。我想不明白的是，标准物质就一种，怎么出来两个大峰，按理说一般主峰比较大，其他杂质峰应该很小猜对

前面两个峰怎么也分不开

开始也认为5min那个峰是我要的峰，后来调整梯度发现5min以前还有为分开的大峰。关键是不同溶度下，对应的峰面积都在变化。而且所能比例与溶度比例对不上。

这个是工艺技术商给的，不是什么标准。以后我的样品是固体颗粒，必须用乙酸乙酯和正己烷当溶剂把里面的抗氧剂萃取出来进行测定。原方法是用内标，3，5二叔丁基4羟基苯甲酸是内标物。我想改成外标。抗氧剂的标准物资还没有到，我就现用3，5二叔丁基4羟基苯甲酸当样品试试在给定的条件下能不能出峰并把他分离开来。