我是风儿
第1楼2016/08/10
二
检测方法的建立及注意事项
1、前处理
取1g小麦粉至10mL离心管,加入5mL丙酮,摇床200r/min,震摇20min,离心取上清液2ml至另一10ml带刻度离心管,加入1mL5%DMSO溶液,40℃氮吹至液体体积<1mL,加入5%DMSO溶液至1mL,再加入1mL正己烷,摇床100r/min,40℃震摇20min,离心,弃正己烷层,过滤,待上机。
2、色谱条件
1)色谱柱:ZORBAX SB-CN 250mm*4.6mm*5μm(安捷伦)
2)流动相:5% (V:V)DMSO,流速1.0ml/min
3)检测波长:245nm
3、应注意问题
1)偶氮甲酰胺在C18色谱柱上几乎没有保留,曾尝试在流动相中添加庚烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠等离子对试剂,都无法延迟其出峰时间。因此采用对极性物质有一定保留的氰基柱作为分析柱,其保留时间约4.0~4.5 min,满足分析需要。
2)偶氮甲酰胺极性较强,易溶于二甲亚砜和N,N-二甲基甲酰胺,微溶于水、醇和丙酮等有机试剂。二甲亚砜和N,N-二甲基甲酰胺虽然对偶氮甲酰胺溶解度高,但其保留时间与偶氮甲酰胺相似,会产生干扰,同时二者不易挥发,不易通过挥发除去,也很难对样品进行浓缩富集,故不适合作为提取溶剂。若用水提取,小麦粉在水中很容易成团,会影响偶氮甲酰胺的提取效果,同时小麦粉中的水溶性成分也会对偶氮甲酰胺的分析造成干扰。甲醇、乙腈等作为提取溶剂所得的水溶性杂质较多,也不适合作为提取溶剂。经过比较,以丙酮作为提取溶剂,可满足微量偶氮甲酰胺的提取要求,且所提取干扰杂质较少,因此选用丙酮作为提取溶剂。
3)在氮吹浓缩过程中,若将丙酮吹至近干,再加入定容溶剂时偶氮甲酰胺很难复溶回去,导致回收率极低,若在氮吹过程中加入1mL5%DMSO则能有效提高偶氮甲酰胺的回收率。
4)正己烷除去脂溶性杂质。
5)DMSO熔点18.4 ?C,低温下会凝固,因此标准储备液选择常温放置。