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CE-SDS图谱中发现的杂峰的理化鉴定

大师

2017/12/15

毛细管电泳（CE）

抗体分子的异质性与分子量变异体
抗体分子作为复杂的四聚体蛋白，具有质量不均一的特点，即“异质性”。异质性可能来自于抗体分子复杂的生物合成途径，如细胞系及培养工艺影响糖基化，也可能来源于纯化、制剂工艺中产生降解或聚体。
异质性可分为电荷异构体和分子量异构体。以重组人源化单克隆抗体为例，其分子量异构体包括：游离的轻／重链片段、蛋白质的断裂片段、不可分离的更高分子量的杂质、二硫键异构体、糖基化异构体等。
分子量异构体可以宏观表现为：在SDS电泳图上出现弥散或多个条带；在CE－SDS谱图主峰以外出现小杂峰。这是由于抗体分子量差异造成的异质性。

传统SDS电泳技术由于分辨率问题，常常不能有效检测抗体的分子量异质性，而CE-SDS具备较高的灵敏度和分辨率，能够快速准确地检测抗体的分子量异构体及杂质。另外CE-SDS可以实现样品制备自动化，大幅提高了样品分析的效率和精确度。
但是由于CE样品量非常少，仅仅能满足常规分析获得分子量异构体和杂质的含量及大致分子量，不能对相关物质进行准确鉴定。
一种新型高分辨率分子量异构体制备工具
自由流电泳（FFE）是一种高分辨率的分子量构体分离制备工具，在达到CE-SDS的分辨率的同时，单次实验分离量可以达到100ug蛋白。整个分离过程在液体中进行以便进行下一步的溶剂交换，非常适合进一步对蛋白结构进行深度分析研究。

FFE分离分子量构体的原理

1，快速引入样品，形成一条样品带；
2，停止buffer和样品泵，完成进样；
3，打开电压，SDS变性的蛋白开始电泳；
4，电泳完成，形成多个条带，断掉电压；
5，打开buffer泵快速推出样品，被分离的异构体进入不同的通道，收集在96孔板中。
注：一次实验大约需要10～20min，可分离高达100ug蛋白。实验过程控温5～10℃

A，使用FFE分离异构体；
B，收集馏分到96孔板；
C，检测96孔板，保留含有样品的馏分；
D&E&F，溶剂置换；
G，CE-SDS对分离馏分进行质控分析；
H，对馏分进行深度分析；
随着对蛋白药物的研究的深入，分子量异构体的结构鉴定越来越受到重视。FFE可以作为一种高效率的制备工具，对分子量异构体进行高分辨率大规模制备。关于产品和相关分离制备服务，欢迎大家通过邮件yh_biochem@163.com或微信13918897495索取资料，或扫描下方二维码联系。

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