左卡尼汀中间体及成品的分析——PDA及NQAD检测器对比
图1 中间体2紫外吸收光谱图 图2 中间体3紫外吸收光谱图
图3 CAPCELL PAK ADME色谱柱分析结果
图4 中间体2分析结果
图5 中间体2分析结果放大图
表1 中间体2分析结果积分表
图6 中间体3分析结果
图7 中间体3分析结果放大图
表2 中间体3分析结果积分表
同时,我们也使用PC HILIC色谱柱进行了两中间体的共同分析,以期得到二者的基线分离结果,简化分析过程。然而在HILIC模式下,由于乙腈比例较高,且中间体自身需要在短波长下检测,因此可选的缓冲盐浓度及种类均有限;水相分别尝试使用0.1%磷酸溶液、20 mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH 2.5)、20 mmol/L磷酸二氢铵溶液(磷酸调pH 2.5)及不同浓度高氯酸钠溶液,结果均无法得到两中间体的分离;且在盐浓度不足时,中间体由于自身的季铵盐结构易产生吸附作用,很难得到良好峰形,典型谱图如图8所示。
图8 0.1%磷酸条件PC HILIC分析结果
此外对柱温进行筛选,温度升高时保留时间有缩短趋势,但未见二者出现明显分离趋势,结果如图9所示。
图9 不同柱温分析结果
考虑到中间体的整体紫外吸收较弱,应客户要求,使用高灵敏度气溶胶型检测器NQAD进行了分析对比。
由于气溶胶型检测器NQAD要求流动相必须为挥发性盐,因此将水相中的高氯酸钠更换为50 mmol/L甲酸铵溶液(+0.1%甲酸)进行分析,中间体2、中间体3、左卡尼汀共同分析结果如图10-12所示。由于5 mg/mL样品浓度较大,在NQAD检测器上过载,出现信号平头峰或裂峰现象,把浓度稀释10倍后可得到正常峰形。但即使在大浓度样品分析中,未见死时间附近出现明显杂质峰,推测原因可能为杂质分子量较小,为挥发性杂质,无法在气溶胶型检测器上进行良好检出。此外,能够看到中间体在NQAD检测器上均出现多个明显色谱峰。
图10 中间体2在NQAD检测器分析结果
图11 中间体3在NQAD检测器分析结果
图12 左卡尼汀在NQAD上分析结果
由于使用NQAD进行检测时,中间体均出现溶出多个色谱峰现象,怀疑为中间体的成盐离子导致,因此在小浓度下进样NaCl进行了排查,对比结果如图13所示。NaCl保留时间和较大杂质峰保留时间一致,可能为相应对离子。此外,在NQAD系统使用的甲酸铵流动相体系下,中间体2和3得到了分离。
图13 不同样品NQAD比较图
综上所述,使用大阪曹達PC HILIC S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱可完成左卡尼汀中间体及成品的保留,在紫外检测条件下获得较好峰形结果,能够与死时间附近的杂质峰取得良好分离。