液相色谱-串联质谱法测水果和蔬菜中氟虫腈残留量的方法验证

高秋荣

2018/07/09
国联质检团队

私聊

液质联用（LCMS）

液相色谱-串联质谱法测水果和蔬菜中氟虫腈残留量的方法验证

1 范围
本标准规定了苹果、橙子、洋白菜、芹菜、西红柿中450种农药及相关化学品残留量液相色谱-串联质谱的测定方法。
本标准适用于苹果、橙子、洋白菜、芹菜、西红柿中450种农药及相关化学品残留量液相色谱-串联质谱的测定。
2 规范性文件
本方法依据GB/T 20769-2008《水果和蔬菜找那个450中农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》。
3 原理
试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，氨基固相萃取柱净化，用乙腈+甲苯（3+1）洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明，本方法所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1试剂及其配制
4.1.1乙腈：色谱纯
4.1.2正己烷：色谱纯
4.1.3异辛烷：色谱纯
4.1.4甲苯：优级纯
4.1.5丙酮：色谱纯
4.1.6二氯甲烷:色谱纯
4.1.7 甲醇：色谱纯
4.1.8有机微孔过滤膜：0.22μm
4.1.9氨基固相萃取小柱：1g,6mL
4.1.10乙腈+甲苯（3+1，体积比）
4.1.11乙腈+水（3+2，体积比）
4.1.12 0.05%甲酸溶液（体积比）
4.1.135mmol/L乙酸铵溶液：称取0.375g乙酸铵加水稀释至1000mL
4.1.14无水硫酸钠：分析纯，用前再650℃灼烧4h,贮存在干燥器中，冷却备用。
4.1.15氯化钠：优级纯
4.1.16氟虫腈标准品:纯度≥95%
4.1.17烯酰吗啉标准品：纯度≥95%
4.1.17.1标准储备溶液的配制：分别称取10mg（精确至0.1mg）标品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，储备液浓度为：1.0mg/mL。
4.1.17.2标准工作液的配制：分别吸取氟虫腈和烯酰吗啉的标准储备液各 0.01mL、0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，工作液浓度为： 1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL
5 仪器和设备和材料
5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪：配有电喷雾电离源（ESI）
5.2分析天平：感量0.1mg和0.1g
5.3高速组织捣碎机：转速不低于20000r/min
5.4 离心管：80mL
5.5 离心机：最大转速为4200r/min
5.6旋转蒸发仪
5.7鸡心瓶:200mL
5.8移液管：1.0mL
5.9样品瓶：2mL
5.10氮气吹干仪
6 试样处理
6.1试样的制备
6.1.1提取：
6.1.1.1称取20g(精确到0.01g)试样匀浆，置于80mL离心管中，加入40mL乙腈，用高速组织捣碎机再15000r/min,匀浆提取1min,加入5g氯化钠，再匀浆提取1min,在3800r/min离心5min,取上清液20mL，在40℃水浴中旋转浓缩至1mL，待净化。
6.1.1.2净化：在氨基固相萃取柱中加入约2cm无水硫酸钠，并放入下接鸡心瓶的固定加上，加样前先用4mL乙腈+甲苯（3+1）预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，并更换鸡心瓶接收，再次用2mL乙腈+甲苯（3+1）洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入柱中，在柱上加上50mL贮液器，用25mL乙腈+甲苯（3+1）洗脱农药，合并鸡心瓶中，并在40℃水浴上旋转浓缩至约0.5mL,将浓缩液置于氮气吹干，迅速加入1mL的乙腈+水（3+2），混匀，经0.2μm滤膜过滤，进行液相色谱-串联质谱测定。
7 测定条件
7.1 仪器条件：
7.1.1色谱柱：C18柱，柱长150mm，内径2.1mm，粒径1.7μm。
7.1.2流动相：A相（乙腈%） B相：5mmol/L乙酸铵（含0.02%甲酸）

时间	A：乙腈	B：5mmol/L乙酸铵（含0.02%甲酸）
0	10	90
2	10	90
3	90	10
7	90	10
9	10	90
11	10	90

7.1.3流速：0.3mL/min。
7.1.4进样体积：1.0μL
7.1.5柱温：30℃。
7.2质谱条件：
7.2.1离子源：ESI；
7.2.2扫描方式：氟虫腈：负离子扫描；
7.2.3检测方式：多反应监测；
7.2.4 DL温度：250℃；
7.2.5加热块温度：400℃；
7.2.6干燥气的流量：15L/min； 7.2.7雾化气流量：3L/min。

项目名称	电离模式	监测离子对	碰撞电压V
氟虫腈	ESI^-	436.7/332.05	16.0
氟虫腈	ESI^-	436.7/330.0	16.0

X(μg/kg)=	c×V×1000×f
	m×10000

8 结果处理

式中：X—样品的各组分的含量，μg/kg；
C —试样被测液中各组分的测定浓度，ng/mL；
V —试样定容体积，mL；
1）.线性结果
将标准系列工作溶液分别注入液相色谱-串联质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
Y=3448.89*X+2974.83R^2=0.9992176

以上结果表明氟虫腈在1.0~10.0 ng/mL范围内，R^{^2}= 0.9992176 ，氟虫腈浓度和峰面积呈线性关系，线性良好，符合要求。
2）.检测限结果
将1.0μg/mL标准溶液逐级稀释至S/N=3.03，得出氟虫腈的方法检出限为0.080μg/kg，符合规定要求。

3）.方法精密度（重复性）结果
取氟虫腈阴性样品进行加标的试样连续进样6次，进样体积为1.0μL。

项目	1	2	3	4	5	6
含量（μg/kg）	0.152	0.152	0.151	0.152	0.152	0.154
平均值（μg/kg）	0.152
RSD%	0.693

本方法的精密度为0.693%，符合样品的精密度要求。因此，本次测定均符合要求。

4）.准确度验证（加标回收）
与样品同步处理，对样品加标，取20.0ng/mL的标液0.15mL、0.80mL、1.00mL同样品同步处理后，结果见下表：

序号	m （g）	V （mL）	C （ng/mL）	稀释倍数	含量（μg/kg）	加标量（μg/kg）	回收率 %
1#	20.0089	1.0	ND	2.0	ND	/	/
2#	20.0010	1.0	ND	2.0	ND	/	/
加标1	20.0323	1.0	1.249	2.0	0.125	0.150	83.3
加标2	20.0402	1.0	6.753	2.0	0.674	0.800	84.2
加标3	20.0721	1.0	8.534	2.0	0.850	1.00	85.0