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细胞传代的操作方法

上海喆图科学仪器有限公司

2019/03/14

常用设备综合讨论

需要准备的器材：酒精喷壶、PBS缓冲液、胰酶、培养基、巴氏吸管、水浴锅、移液器、离心管、超净台、CO2培养箱、离心机等。
然后我们要把我们准备的器材放入超净台，打开紫外杀菌灯灭菌，需要注意的是若培养的细胞对温度比较敏感，将培养基瓶子放入37℃的水浴锅中，使得培养基温度在37℃，再转移到超净台紫外灭菌，当然一般的细胞对培养基的温度不是很敏感，不用对培养基加温也是可以的。细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。
接下来小编就开始来操作了，全程严格无菌操作！
1、紫外照射灭菌后，穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩。
2、从CO2培养箱中取出细胞培养瓶，用酒精喷壶在培养瓶表面喷洒75%酒精消毒，转移培养瓶到超净台。
3、打开盖子，轻轻吸出旧的培养液，用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次，弃去PBS缓冲液。
4、可用移液器加入2-3ml胰酶，“十字”晃动，使胰酶充分接触细胞。
5、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台，镜下观察细胞消化情况，当细胞变圆且大量脱落时，准备终止消化，用75%的酒精喷洒培养瓶表面，转移到超净台
6、用移液器加入等量含血清培养基，终止消化。移液器充分吹打，使细胞能够完全脱落。
7、将培养瓶中混合液体转移至离心管中，配平，离心5分钟左右。
8、离心好后，用酒精喷壶喷洒离心管表面，转移进超净台，打开盖子，将上清液倒入废液缸。
9、加入适量体积含血清培养基，用移液器或巴氏吸管轻轻吹打，制成细胞悬液。
10、将细胞悬液分装进3个洁净灭菌培养瓶，加入适量培养基，盖好盖子
11、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台，观察细胞情况，细胞应保证一定数量，数量太少会影响生长情况。
12、在培养瓶上做记号，注明传代时间，细胞种类，操作人员等信息。在放入CO2培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面，然后整理操作台，用75%酒精擦拭超净台台面，清理废液和垃圾。

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检测老菜鸟

第1楼2019/03/16

应助达人

挺不错的步骤

0

qianguiyun1

第2楼2019/03/16

应助达人

这个似乎太深奥了

0

wccd1

第3楼2019/03/26

如果配一些图片就更直观了。

0

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