可见分光光度法

可见分光光度法

分光光度分析有两种，一.种是利用物质本身对紫外及可见光的吸收进行测定，另一种是生成有色化合物即“显色”以后测定。

一、显色反应

在光度分析中，将试样中被测组分转变成有色化合物的反应叫显色反应。能与被测组分生成有色物质的试剂称为显色剂。显色反应分为两类:络合反应和氧化还原反应。其中络合反应是最主要的显色反应。

对显色反应的要求:

①选择性好 一种显色剂最好只与一种被测组分起显色反应，或显色剂与干扰离子生成的有色化合物的吸收峰与被测组分的吸收峰相距较远。这样干扰较少。

②灵敏度高即有色化合 物的摩尔吸收系数大。

③有色络合物的离解常数要小有色络合物的离解常数愈小，络合物就愈稳定。络合愈稳定，光度测定的准确度就愈高，并且还可以避免或减少试样中其它离子的干扰。

④有色络合物的组成要恒定，化学性质要稳定。

⑤如果显色剂有颜色，则要求有色化合物与显色剂之间的颜色差别要大，以减小试剂空白。一般要求有色化合物与显色剂的最大吸收波长之差在60nm以上。

⑥显色反应的条件要易于控制以控制，测定结果的再现性就差。

显色剂：有机与无机。大多数有机显色剂本身为有色化合物。

反应影响条件：

1:显色剂用量：加入过量的显色剂是必要的，但过量太多会引起副反应。

2:溶液酸度：浴液的酸度对光度测定有显著影响，它影响待测组分的吸收光足色剂的形态、待测组分的化合状态及显色化合物的组成。

第一， 酸度不同时，显色化合物的组成和颜色可能不同。例如与磺基水杨酸作用，在不同的pH.反应不同。

第二，溶液酸度变化，显色剂的颜色可能发生变化，原因是很多有机显色剂是酸碱指示剂，其颜色随pH值变化而变化。

第三，溶液酸度过高会降低配合物的稳定性，特别是对弱酸型有机显色剂和金属离子形成的配合物影响较大。

第四，溶液酸度过低会引起金属离子水解生成氢氧化物沉淀。这种现象常发生在有色配合物的稳定度不是很大，并且被测金属离子所形成的氢氧化物的溶解度又很小的情况下。

3:温度的影响

大力的监色反应在室遍下即可进行而有些有色配合物在较高的温度下容易分解，因此对才不同的显色反应通过实验选择其适宜的显色温度。由于温度对光的吸收及颜色的深没都有影响，因此在绘制标准曲线和进行样品测定时，应使温度保持一致。

5:显色时间

所谓显色时间指的是溶液颜色达到稳定时的时间。不少显色反应需要-一定时间才能完成，而且形成的有色配合物的稳定性也不一样。因此必须在显色后一定的时间内进行比色测定。