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趣谈凝胶渗透色谱GPC/SEC – 检测篇之番外II之分子尺寸表征Rh和Rg

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2019/11/29

凝胶色谱（GPC）

正如之前谈到的高分子的结构尺寸的表征手段，可以通过光散射检测器得到分子的均方旋转半径Rg，也可以通过粘度检测器得到分子的流体力学半径Rh。Rg和Rh具有不同的概念，其比值ρ=Rg/Rh可以反应分子的密度，即分子密度越大ρ值越小。

粘度检测器得到的特性粘度IV代表了高分子密度的倒数，可以利用如下公式得到Rh的大小

Rh的范围可以<1nm – 色谱分离上限。

光散射检测器检测大分子时散射光出现不均匀散射，通过Zimm外推的斜率，可以得到Rg的大小。

Rg的检测范围是从分子产生不均匀散射，即分子大于10-12nm–色谱分离上限。

下图为一个宽分布高分子的流出曲线，及其对应的Rg、Rh、Mw可以看出，Rh可以在全部分子量范围内得到分子大小，而Rg只能够得到高分子量，即分子大于10nm，分子量超过~15万的线性分子的大小及结构特征。

Rg的检测目的通常涉及到一些高分子的理论模型及其计算，而Rh的检测则兼顾理论计算及其实际应用。对于生物高分子，尤其是蛋白质、单克隆抗体检测而言，由于其结构趋近于实心球结构，Rh更接近于其实际尺寸，而且由于通常其体积较小，散射光为均匀散射，则根本无法通过光散射检测器得到Rg。

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小不董

第1楼2019/12/04

应助达人

光散射可以较好的测定出Rg，粘度检测器可以较好的检测出Rh，如果再有浓度检测器，就可以更好得分析高分子的状态了。
有说法是光散射检测测定其分子量，柱效不是很重要，分离是否好，对其影响不大，是这样的吗？

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