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关于大孔树脂分离纯化的问题,请大神指教!

  • Insp_494cf49a
    2020/02/10
  • 私聊

分离/萃取

  • 我用80%乙醇得到黄酮提取液,现在需要进行纯化,选用的HPD100非极性树脂,2.6*50cm的柱子。

    因为第一次接触纯化,没人指导,所有不清楚怎么操作,我看了些资料,想问问大家我理解的对不对。

    首先把新买的树脂进行预处理:95%乙醇泡24h,用乙醇洗至洗脱液和水混合不浑浊,再用水洗至无醇味。然后用5%盐酸洗,水洗至中性,5%氢氧化钠洗,水洗至中性。(有的文献中没有后面的酸洗和碱洗,请问这个步骤的意义是什么呢?可以省略吗?)

    湿法装柱和上样:往柱子里塞一块棉花,用水打湿。

    把溶在水里的树脂倒进柱子,敲打柱子,等树脂沉淀后,打开活塞放水,直到距离树脂面1cm关闭活塞。(这一步骤有2个疑问:1.装柱量2/3是指放完水后的树脂占柱子的2/3吗? 2.有的是留1cm高的水,有的是不留,有的还要放一片滤纸,这个应该怎么弄呢?)

    按照计算的最大上样量,把提取液倒入柱子内,等液面下降至与树脂快平齐的时候,加入洗脱剂,收集洗脱液。(1.最大上样量是不是就是,洗脱液中黄酮浓度几乎等于进样浓度时的体积?2. 加入洗脱剂的时间,是在提取液的液面下降至与树脂快平齐的时候吗?)

    因为我的样品是用乙醇提的,我看许多文献都是把提取液冻干,再用蒸馏水溶解上样,还有的说提取液要无醇。我们实验室没有冻干机,所以想请问一下,我直接把提取液上样可以吗?为什么不能有醇呢?

    麻烦大神解答一下,感谢!
  • }

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  • 通标小菜鸟

    第1楼2020/02/10

    应助达人

    装柱量2/3应该是树脂高度,不包括水,树脂上方一般是需要留1cm高度液体的,不能干,装入一层滤纸的作用有两个,一个是过滤作用,去除杂质,另外一个作用是缓冲作用,防止你上样的时候树脂被冲起

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  • Insp_494cf49a

    第2楼2020/02/10

    好的,十分感谢!

    还想请教您一下,这个上样的提取液是规定不能含有醇吗?

    通标小菜鸟(v3141805) 发表:装柱量2/3应该是树脂高度,不包括水,树脂上方一般是需要留1cm高度液体的,不能干,装入一层滤纸的作用有两个,一个是过滤作用,去除杂质,另外一个作用是缓冲作用,防止你上样的时候树脂被冲起

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  • Shy WONG

    第3楼2020/02/10

    应助达人

    可以采用醇类的提取液过柱,有条件的话有可以将初级的提取液浓缩后再过柱。

    纯化的关键是过柱的吸收效率和洗脱的速率(含梯度)。

    你采用什么溶剂来洗脱?

    Insp_494cf49a(Insp_494cf49a) 发表:好的,十分感谢!

    还想请教您一下,这个上样的提取液是规定不能含有醇吗?

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