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HPLC测定兽药(恩诺沙星),色谱柱变短了,怎么不出峰呢?

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  • 做兽药(恩诺沙星)残留量检测,高效液相色谱-荧光检测,国标方法是用色谱柱C18 4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-水=18:82,流速0.8mL/min
    恩诺沙星的保留时间在16min左右。

    实验室没有长柱子,我用的是C18 4.6×100mm,3.5μm。流动相:乙腈-水=20:80,流速1mL/min。进了一针恩诺沙星对照品,3min左右出个峰,峰型也不太好,感觉和溶剂峰差不多。不确定是不是恩诺沙星,但之后跑了1个小时都没东西出来。
    之后又进个对照,条件改成乙腈-水=10:90,想着峰会不会延后,在10min左右出峰。但竟然跑了好久,也没东西出来。

    请问大家是怎么回事呢?色谱柱太短了,做不出吗?
    相同比例的流动相,色谱柱变短,粒径也变小了,同一物质的保留时间是缩短还是延迟?

    下面是国标方法做出的图:


  • }

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  • 987321654

    第1楼2020/02/11

    流速有点大,是不是直接就没分离就冲跑了。或是进样量会不会有点小,灵敏度不行啊

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