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某单抗项目HIC-HPLC方法开发(BioCore HIC-Butyl使用体会)

新手上路

  • 众所周知大分子药物比小分子药物复杂的多所以对抗体药物质量研究尤为重要包括结构确证功能表征理化特性生物学活性及免疫学特性研究其中液相相关的理化特性研究包括:SEC-HPLCIEC-HPLCHILIC-UPLCRP-UPLCHIC-HPLC方法等。而高效液相相关的分析方法研究中,选择合适的色谱柱非常关键,在项目早期进行方法开发时,应尝试不同厂家的色谱柱进行考察,选择性能最优的色谱柱。


    在领导同事的推荐下,了解到纳谱分析可以提供免费试用色谱柱,于是进行了联系工作人员服务态度非常好,到货很及时申请后不久我们就拿到了试用柱,并附带了详细的《色谱柱使用指南》,包含色谱柱的使用注意事项、色谱柱的钝化/清洗/保存、流动相的配制等。

    我们在进行一个单抗项目的HIC-HPLC方法研究HIC-HPLC方法中样品各组分是在高盐环境中与色谱柱中固定相结合而后通过递减的盐梯度(即递增的疏水性)进行洗脱,可通过疏水色谱分析对蛋白样品中异构体进行分析,最初采用实验室现有的某款色谱柱,未达到理想的分离效果,因此申请了纳谱分析的BioCore HIC-Butyl5μm, 4.6×250mm)进行试用。试验中,我们严格按照《色谱柱使用指南》进行操作,首先用蛋白屏蔽色谱柱上可吸附位点,然后进样分析,从100%A相梯度洗脱到100%B相,色谱柱温度设为25℃、检测器波长采用280nm,流速0.5mL/min,洗脱时间60min,发现在30min后出峰;为了缩短分析时间和简化流动相配制,将《色谱柱使用指南》中流动相A的硫酸铵浓度2M调整为1M,洗脱梯度调整后图谱如图1所示分离度较好

    1.纳谱分析色谱图分析结果



    在相同系统、相同色谱条件下,与其他厂家的疏水色谱柱对比如图21所示,BioCore HIC-Butyl的色谱柱对两组分的分离度好理论塔板数高分离效果较好。

    2.纳谱分析与其他厂家的疏水色谱柱谱图比较

    1不同色谱分析结果表


    名称

    两个主要峰相对保留时间(min

    塔板数

    分离度

    BioCore HIC-Butyl

    1.268

    25445

    1.60

    其他色谱柱

    1.183

    21987

    1.56



    综上,本次试用色谱柱是一次非常成功的体验,纳谱分析的这款BioCore HIC-Butyl色谱柱与其他厂家的相比性能较好,符合我们进行HIC分析方法开发的需求,后续考虑购买。另外,关注了纳谱分析微信公众号,里面经常有相关技术的干货分享。

    本文为【纳谱分析第一有奖征文活动】获奖作品,原作者信息:

    齐鲁制药生物技术开发研究院**
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