当前位置:仪器社区 > 凝胶色谱(GPC)

青霉素V钾聚合物测定——凝胶色谱G-10与体积排阻色谱SEC的对比

  • sh104301
    2020/06/23
    仪信通会员战队
  • 私聊

凝胶色谱(GPC)

  • 我司产品目前对β-内酰胺类抗生素聚合物检测均采用中国药典Sephadex G-10的方法,该法分离机理为:由于 Sephadex G-10 的排阻分子量仅为 700d,因此,除部分寡聚物外,内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留,即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰。在特定条件下,内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用,可以形成缔合物,导致其表观分子量增大,此时在 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为。利用此原理,在 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中,以药物自身为对照品,测定其在特定条件下缔合时的峰响应; 再改变色谱条件,测定样品中高分子杂质和药物分离后的峰响应; 按外标法计算,即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。我司在多批样品的测定实践中,遇到了很多问题,比较头疼的是系统适用性经常达不到要求,导致偏差产生,而经根本原因分析为方法本身问题,因此,选用专属性更好,灵敏度更高的方法具有非常大的现实意义。

    【凝胶色谱原理】

    一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动:垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。

    【体积排阻色谱(SEC)分离原理】

    分子的体积排阻,样品组分和固定相之间原则上不存在相互作用,色谱柱的固定相是具有不同孔径的多孔凝胶,只让临界直径小于凝胶孔开度的分子进入(保留),其孔径大于溶剂分子,所以溶剂分子可以自由地出入。高聚物分子在溶液中呈无规则线团,线团的体积和分子量有一定的线性关系,对不同大小的溶质分子可以渗透到不同大小的凝胶孔内不同的深度,小的溶质分子,大孔小孔都可以进去,甚至可以渗透到很深的孔中。因此小的溶质分子保留时间长,洗脱体积大,而大的溶质分子保留时间短,洗脱体积小。



    Sephadex G-10BioCore SEC-150参数比较




    液相色谱仪器条件

    色谱柱BioCore SEC-150,5um 7.8*300mm

    流动相150 mM 磷酸盐缓冲液(pH6.8):乙腈=95:5

    流速0.6 mL/min

    柱温25

    进样量10 μL

    检测器268nm

    样品青霉素V,流动相配制,浓度为5mg/ml

    峰名称:因无聚合物对照品,根据分子筛分离原理,主峰前色谱峰均认定为不同聚合度的聚合物。

    图谱:





    心得体验

    此次首次采用纳谱分析开发的SEC色谱柱,流动相在色谱柱说明书推荐流动相基础上,加入5%乙腈,即得到较好的分离效果,理论板数由G-10柱的几百提高到现在的两万多,主峰与相邻峰分离度达到1.7,达到基线分离,各聚合物峰峰形较好,且彼此分开,与传统G-10相比,具有无可比拟的优越专属性。纳谱分析品牌值得信赖,以后会继续支持!

    本文为【纳谱分析第一有奖征文活动】获奖作品,原作者信息:

    单位:西南药业股份有限公司

    姓名:李*

    谱柱信息:纳谱分析BioCore SEC-150,5um 7.8*300mm
  •   
下载APP,发帖回帖更方便

推荐学习更多>>

https://mapi.instrument.com.cn/ykt/api/GetCourseByBBSType?forumid=625&top=5
    +关注 私聊
  • 小不董

    第1楼2020/10/28

    应助达人

    楼主测试的是青霉素V钾,用的紫外268nm,是什么目标物在这紫外波长有吸收呢?
    27分钟有个很大的峰,这个是什么物质呢,前面出峰的样品也没法判断,有想过用什么高分子聚合物来大致判断出峰时间和分子量的关系吗?

0
打开APP,逛社区更方便
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...