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用HPLC测定东莨菪碱氢溴酸盐含量

  • Insm_c4783341
    2020/10/10
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新手上路

  • HPLC测定东莨菪碱氢溴酸盐含量

    本文目的:建立测定东莨菪碱氢溴酸盐的方法,方法采用HPLC法,色谱柱:SILICYCLE -C18(4.6*150mm 5um),流速:1ml.min-1,流动相:0.1%TBA:MeOH=60:40,检测波长:214nm.

    东莨菪碱以洋金花为原料提取得到。中国的中药麻醉剂洋金花制剂,源于公元2世纪名医华陀的麻沸散,其有效成分就是东莨菪碱.东莨菪碱为颠匣中药理作用最强的一种生物碱,可用于阻断副交感神经,也可用作中枢神经系统制剂。作用类似颠茄碱,但作用较强且较短暂。可用于麻醉镇痛、止咳、平喘,对晕动病有效,也可用于控制巴金森病的僵硬和震颤将洋金花粗粉用50℃乙醇渗漉,至渗出液几乎无生物碱为止。渗漉液减压蒸馏回收乙醇,所得浸膏用硫酸提取,提取液加碳酸钠调pH9-10,用氯仿提取,提取液蒸馏回收氯仿得总生物碱,然后进行分离、成盐得东莨菪碱氢溴酸盐东莨菪碱氢溴酸盐结构式如图1

    图1东莨菪碱氢溴酸盐

    1、 仪器及试剂

    Aglient1260,

    色谱柱:SILICYCLE -C18(4.6*150mm 5um)

    流动相:0.1%TBAMeOH0.1%NaH2PO4MeOH

    2、 高效液相色谱法的优化

    2.1色谱柱为SILICYCLE -C18(4.6*150mm 5um),流动相为0.1%NaH2PO4MeOH

    东莨菪碱氢溴酸盐结构式可以看出来是电离能力比较强的样品,此样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留。应用色谱柱SILICYCLE -C18(4.6*150mm 5um),流动相为0.1%NaH2PO4MeOH流速:1ml.min-1进行高效液相色谱法的条件的优化,样品能够在检测波长204nm情况下有保留时间且保留时间大于2min。改变流动相的比例改变保留时间,

    流动相0.1%NaH2PO4MeOH=50:50时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图2

    流动相0.1%NaH2PO4MeOH=70:30时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图3

    流动相0.1%NaH2PO4MeOH=95:5时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图4

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图2

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图3

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图4

    根据东莨菪碱氢溴酸盐化学性质以及厂商提供的样品的相关信息,东莨菪碱氢溴酸盐在检测波长256nm有紫外吸收,且厂家提供的东莨菪碱氢溴酸盐的纯度较高,可以判定保留时间t=1.433-1.674,从色谱图看水相对东莨菪碱氢溴酸盐的保留时间影响极小,最大的保留时间为1.674,难以满足保留时间大于2min。

    2.2色谱柱为SILICYCLE -C18(4.6*150mm 5um),流动相为0.1%TBAMeOH

    离子对试剂作用是在使用液相色谱法分析电离能力比较强的样品时,样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留,这时要加入相应的离子对试剂,将分析物上的离子进行结合,形成在柱子上有保留的分子。我们使用离子对试剂将它留住。四甲基氢氧化铵(TBA)是众多离子对试剂的一种,使东莨菪碱氢溴酸盐的保留时间延长,同理应用C30反相色谱柱也使东莨菪碱氢溴酸盐的保留时间延长。

    应用色谱柱SILICYCLE -C18(4.6*150mm 5um),流动相为0.1%TBAMeOH流速:1ml.min-1进行高效液相色谱法的条件的优化,样品能够在检测波长214nm情况下有保留时间且保留时间大于2min。改变流动相的比例改变保留时间,

    流动相0.1%TBAMeOH=10:90时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图5

    流动相0.1%TBAMeOH=30:70时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图6

    流动相0.1%TBAMeOH=70:30时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图7

    流动相0.1%TBAMeOH=60:40时东莨菪碱氢溴酸盐色谱图8

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图5

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图6

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图7

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图8

    东莨菪碱氢溴酸盐色谱图5图6图7可知,随着流动相0.1%TBA的比例增大0.1%TBA东莨菪碱氢溴酸盐的峰型的保留时间延长,峰型由峰拖尾变成滞留。同时说明存在某个流动相0.1%TBA的比例峰型极好,东莨菪碱氢溴酸盐色谱图8可知流动相0.1%TBA:MeOH=60:40时峰型极好。










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