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氨基柱反相使用,对水相的比列有要求吗

  • Ins_55be91df
    2020/10/19
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 氨基柱反相使用,对水相的比列有要求吗?求大佬解惑。
  •   
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  • wangjunyu

    第2楼2020/10/19

    应助工程师

    氨基柱的使用注意事项:
    说明: .氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的,正常情况新氨基柱保存在正相环境中,例如LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈( 99 : 1)中。而我们做糖分析是用反相流动相,所以要先用异丙醇过渡。
    反相使用
    1 先用异丙醇冲洗管路(此时不接色谱柱);然后接上色谱柱,以低流速( 0.1ml/min )用30 倍柱体积的异丙醇过渡(差不多一夜) 。(必须用异丙醇过渡,否则会发生乳化现象, 导致色谱柱使用效果变差。)
    2 再换成流动相,流动相平衡时间要长一些(为以后色谱柱的稳定打好基础)。
    3 配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取,需调pH 值时要精密到0.1 。
    4 反相条件下使用时,要特别注意控制pH 值范围, pH 值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH 范围在pH3.0-7.0
    5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类, 建议在用分析流动相之前, 先用80% 水做流动相
    过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
    色谱柱的冲洗:
    乙腈:水( 95 :5 ) ,过渡到乙腈:水( 50 :50 ),最后保存在乙腈:水( 95:5)中。
    色谱柱的保存
    反相使用时, 如短期不用, 可用95% 甲醇或乙腈保存; 长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换,最后用正己烷保存。
    再生:
    再生方案1:NH2 柱用于反相条件时, NH2 键会水解,尤其是在该柱子pH 范围以外,在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快,如果在这个条件下使用需要清洗一下,需要用10 倍柱体积溶液冲洗,如下:
    先用5-10 倍的柱体积的含0.5-1.0 %NH3 的乙腈-水(50:50) 溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),
    再进行下面操作:
    95 %水/5 %乙腈THF 四氢呋喃95 %乙腈/5 %水并保持95 %乙腈/5 %水继续冲洗,以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。(此方法很多人尝
    试)
    再生方案2:柱子使用一定时间后,柱效下降,老化,也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10 倍柱体积的下列溶液冲洗:95 %水/5 %乙腈THF 四氢呋喃
    95 %乙腈/5 %水再走流动相即可
    氨基柱的活化
    方案1:依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子(各以0.5ml/min 的流速, 20 倍柱体积),再换流动相。这些清洗方法,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法,色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
    6.2
    方案2: NH2 柱用于反相条件时, NH2 键会水解,尤其是在该柱子pH 范围以外,在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快,如果在这个条件下使用需要清洗一下,需要用10 倍柱体积溶液冲洗,如下: 95 %水/5%乙腈THF 四氢呋喃95 %乙腈/5 %水并保持95 %乙腈/5 %水继续冲洗,以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。
    6.3
    方案3:柱子使用一定时间后,柱效下降,老化,也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10 倍柱体积的下列溶液冲洗:
    95 %水/5 %乙腈THF 四氢呋喃95 %乙腈/5 %水
    再走流动相即可

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  • sdlzkw007

    第1楼2020/10/19

    应助达人

    任何色谱柱都是反复使用,各自的使用注意事项遵守就可以了

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