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动物源食品中硝基咪唑残留量测定的前处理方法

  • 国家标准物质中心
    2020/10/30
  • 私聊

坛墨质检-标准物质

  • 硝基咪唑的危害及检测目的

    硝基咪唑类药物nitroimidazole,NMZs是一类具有抗原虫感染和抗厌氧菌的硝基杂环类抗菌药物其具有抗菌和抗原虫作用近年来作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业生产中同时也是一种生长促进剂以促进畜禽的生长及改善饲料转换率由于这类化合物含有的硝基杂环类物质具有潜在致癌、致畸和致突变作用因此欧美等发达国家已禁止在食源性动物中使用硝基咪唑类药物我国也对硝基咪唑类药物进行了严格的限制2020生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》中仅规定了甲硝唑和地美硝唑种物质允许作治疗使但不得在动物性食品中检出;同年农业农村公告第250号,洛硝达唑、替硝唑列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中

    本文阐述了如何将硝基咪唑类化合物从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据国标GB/T 21318-2007,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

    检测项目:硝基咪唑类原药及代谢产物

    应用范围:猪肉/鸡肉/牛肉/猪肝/鸡肝/牛肝/猪肾/牛肾/鱼肉/奶粉/蜂蜜

    液相色谱-质谱/质谱法

    方法原理:
    样品中残留的8种硝基咪唑、2种代谢物用甲醇-丙酮均质或超声波提取,经乙酸乙酯液液分配,以凝胶色谱(GPC)净化,再经固相萃取(SPE)净化,采用液相色谱/串联质谱确证,外标法定量测定。

    前处理仪器:


    凝胶色谱仪(配有馏份收集浓缩器);组织捣碎机;均质器;超声波发生器;旋转蒸发器;高速离心机;氮吹仪;固相萃取装置;具塞锥形瓶(250 mL);分液漏斗(250 mL);浓缩瓶(50 mL250 mL)。

    检测仪器:LC-MS/MS+ESI







    前处理方法

    1.提取

    肌肉组织、脏器组织样品及水产品


    准确称取约20 g样品(精确至0.1 g250 mL具塞锥形瓶中,加入10 g硅藻土(80120目)与样品充分混匀,再依次加入5 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮(3+1),高速均质提取3 min。将提取液移入离心管中,于10000 r/min离心2 min,将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮(3+1)重复提取两次,合并提取液。



    蜂蜜、乳及乳制品样品


    准确称取约20 g样品(精确至0.1 g250 mL具塞锥形瓶中,加入10 mL饱和氯化钠水溶液和70 mL甲醇-丙酮(3+1),超声波提取30 min。移入离心管中,于10000 r/min离心2 min,将上层提取液移入250 mL浓缩瓶中。残渣每次再用50 mL甲醇-丙酮(3+1)重复提取两次,合并提取液。



    2.液液分配


    将提取液于40 ℃水浴中旋转浓缩至只剩水相,并转移至250 mL分液漏斗中,加入50 mL饱和氯化钠水溶液和25 mL乙酸乙酯,振摇3 min,静置分层,收集乙酸乙酯相。水相再用

    20 mL乙酸乙酯重复提取两次,合并乙酸乙酯相。经无水硫酸钠柱脱水,收集于250 mL浓缩瓶中,40 ℃水浴中旋转浓缩至近干,加入5 mL乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶解残渣,并用0.45 μm滤膜过滤,待净化。



    3.净化

    凝胶色谱(GPC)净化

    凝胶色谱净化条件如下:


    净化柱:700 mm×25 mmBio Bcads S X3,或相当者;

    流动相:乙酸乙酯-环己烷(1+1);

    流速:4.7 mL/min

    样品定量环:5.0 mL

    预淋洗体积:50 mL

    洗脱总体积:210 mL

    开始弃去体积:90 mL

    收集体积:90 mL

    最后弃去体积:30 mL

    凝胶色谱净化步骤如下:

    5 mL待净化液按照凝胶色谱净化条件进行净化,合并馏份收集器中的收集液于250 mL浓缩瓶中,于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干,加入5 mL甲醇以溶解残渣,待净化。



    固相萃取(SPE)净化


    使用前用5 mL甲醇预淋洗C18固相萃取柱(1 g6 mL),将5 mL溶解液倾入C18固相萃取柱中,以1 mL/min的速度收集流出液,再用10 mL甲醇进行洗脱。收集全部洗脱液于50 mL浓缩瓶中,于40 ℃水浴中旋转浓缩至干。用甲醇溶解并定容至1.0 mL,经0.45 μm滤膜过滤后,供液质测定和确证。



    国标解读及注意事项


    1.硝基咪唑标准物质用甲醇配成1000 μg/mL的标准储备液,在0 4 ℃条件下避光保存,可使用12个月。

    2.如果有条件,建议凝胶色谱净化系统中配合使用紫外检测器,准确监测目标化合物及杂质的流出情况。

    3.固相萃取净化过程中,C18柱作为净化柱使用,注意上样过程中就需要收集流出液,再和洗脱液进行合并。

    4.国标方法中使用基质添加标准曲线,外标法进行回收率的校正。注意做肉类样品的基质添加标准曲线前,先进行洗涤,然后加标,再进行后续提取净化等流程。

    5.建议使用硝基咪唑标准物质相对应的同位素内标,进行回收率的校正。





    参考文献


    GB/T 21318-2007 动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法



    1 肌肉组织、脏器组织样品及水产品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图



    2 蜂蜜、乳及乳制品样品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图








    1 硝基咪唑标准物质信息表


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