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不懂就问,等电点和pka的关系?

  • 歪果仁zZ
    2021/08/02
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 用液相色谱分离蛋白需要考虑等电点吗?等电点与流动相的选择、样品溶液的选择以及ph没有关系是吗?那蛋白有pka吗,pka和等电点的关系是什么?谢谢
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  • dahua1981

    第1楼2021/08/02

    应助达人

    两个就不是同一个概念,等电点(PI)指在某一pH的溶液中,氨两性物质解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等,所带净电荷为零,呈电中性,此时溶液的pH称为该物质的等电点.PKa指酸度系数,又名酸离解常数,在化学及生物化学中,是指一个特定的平衡常数,以代表一种酸离解氢离子的能力,一般来说,较大的Ka值(或较少的pKa值)代表较强的酸.
    氨基酸是两性物质,以中性氨基酸为例,其
    pI=1/2(pKa pKb),Ka、Kb代表氨基酸α碳上羧基和氨基的解离常数.

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  • 歪果仁zZ

    第2楼2021/08/02

    应助达人

    那蛋白有pka吗

    dahua1981(dahua1981) 发表:两个就不是同一个概念,等电点(PI)指在某一pH的溶液中,氨两性物质解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等,所带净电荷为零,呈电中性,此时溶液的pH称为该物质的等电点.PKa指酸度系数,又名酸离解常数,在化学及生物化学中,是指一个特定的平衡常数,以代表一种酸离解氢离子的能力,一般来说,较大的Ka值(或较少的pKa值)代表较强的酸.氨基酸是两性物质,以中性氨基酸为例,其pI=1/2(pKa pKb),Ka、Kb代表氨基酸α碳上羧基和氨基的解离常数.

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  • 歪果仁zZ

    第3楼2021/08/02

    应助达人

    感谢回复,但我还是不太懂

    dahua1981(dahua1981) 发表:两个就不是同一个概念,等电点(PI)指在某一pH的溶液中,氨两性物质解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等,所带净电荷为零,呈电中性,此时溶液的pH称为该物质的等电点.PKa指酸度系数,又名酸离解常数,在化学及生物化学中,是指一个特定的平衡常数,以代表一种酸离解氢离子的能力,一般来说,较大的Ka值(或较少的pKa值)代表较强的酸.氨基酸是两性物质,以中性氨基酸为例,其pI=1/2(pKa pKb),Ka、Kb代表氨基酸α碳上羧基和氨基的解离常数.

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  • dahua1981

    第4楼2021/08/02

    应助达人

    1.用液相色谱分离蛋白需要考虑等电点吗?
    答;不需要考虑。色谱分离和这个没关系。
    2.等电点与流动相的选择、样品溶液的选择以及ph没有关系是吗?
    答:等电点会影响一定pH值下的溶解度。两性分子在水或盐水中在其等电点的溶解度最低,一般会在等电点时从溶液里沉淀出来。生物两性分子如蛋白质即含有酸性的,也含有碱性的官能团。组成蛋白质的氨基酸可能是带正电荷的、带负电荷的、中性的或者本生是两性的。它们的电荷加在一起是蛋白质的电荷。pH值小于等电点时蛋白质的总电荷是正的,大于等电点时是负的。因此使用等电聚焦的技术可以在聚丙烯酰胺凝胶里根据蛋白质不同的等电点把它们分离开来。等电聚焦也是双向凝胶电泳的第一步。
    3.那蛋白有pka吗,pka和等电点的关系是什么?
    答:pKa一般是某一基团的解离常数,一般为酸性基团,例如磷酸有pKa1,pKa2和pKa3.对特定分子的pKa是固定的(水溶液,稀溶液)所以蛋白的pKa没啥意义吧,一般只有等电点,有些可以查到,有些可以用等点聚焦测出。至于某pH值下的缓冲体系中,所有同种蛋白的带电情况是相同的,不存在中性分子比例问题。而非缓冲体系的pH值一般是不稳定的,条件不足以推出该蛋白的中性蛋白比例。

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  • hujiangtao

    第5楼2021/08/03

    应助达人

    蛋白等电点在pH1左右,除蛋白时一般调节提取液pH到1,沉淀蛋白效果不错

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  • user007

    第6楼2021/08/03

    问得好,我也学习一下。

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