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负峰（液相）

遗忘曲线

2021/09/15

液相色谱（LC）

我现在走一个反相色谱，流动相是pH2.5的磷酸盐缓冲液和20%的四氢呋喃，色谱柱:C18,检测器:PDA,检测波长:225nm,我在色谱图中出现负峰，位于第二个与第三个之间，我习惯于在色谱图刚开始的地方也就是V0 处出现负峰，但我从来没有在色谱中间出现负峰，你可以解释这是发生了什么吗？

也许最难的可以从最简单的原理开始：峰表示的是样品和流动相在不同的位置，峰是正是负，峰是否保留，都无关紧要。因此，我们需要做的是找到色谱图中额外的峰的来源，因为他才是我们知道负峰来源的有帮助的信息。

你说你已经习惯了在色谱图的刚开始的位置出现负峰，这些峰很大一个原因是样品基质与流动相在不同的位置出峰，这个可以用样品组成或者pH来解决，除非是用流动相溶解样品，异常（特别）峰一般来自这个不同，对于我们大多数不需要太关心这个，我们意识到这是样品溶解度与流动相之间的差别，有时候我们需要人为的创造这种差别，比如，样品在色谱柱上面富集。

这的确是正确的，通常我的样品有些额外的东西，比如说辅料等，然而他们会在早期洗脱出来，这里也是这样，同时，样品不是完全溶解在流动相里面，而是用流动相稀释。

挑出来说，如果额外的峰是辅料或者其他的其他，那么你就需要进对照，确定干扰峰来自辅料，那么你就需要去除。

我已经想到这个，我已经进对照甚至走流动相，干扰峰依然存在，

好的，这是一个重要的信息，如果你得到相同的现象而不是因为样品的原因，我们就可以排除样品的原因，因此我们需要关注仪器或者流动相本身。

如果你的干扰峰是正的，你可以考虑进样器，用过的注射器，样品瓶的密封件，或者与进样过程相关的东西是否受到污染，因为你的情况并非如此，我认为不是进样过程中污染了

流动相本身以及它接触到的所有组件是这个问题的最有可能原因，设想流动相中的一个成分以很低的浓度存在，并且在色谱在上面有保留,如果你进不含这种成分的流动相，并且得到的负峰的保留因子与进样品是一致的，这个叫做空位色谱法，为了解决这一问题，你需要找到这个物质，不幸的是，你的工作波长很低，你将会看到很多成分在低波长有更高的灵敏度，我相信这就是你刚开始选择这个波长的原因。

听起来你描述的就是我问题的症结所在，那我应该怎么做才能降低它或者更近一步消除它呢？

首先你需要检测流动相本身，四氢呋喃的质量怎么样？水的质量怎么样？你可以进一个用四氢呋喃溶的样品和用水溶解的样品，看他们是不是和负峰有相同的保留因子，如果出现相同的峰，那恭喜你，问题找到了。你可以一步步解决，如果在四氢呋喃中出峰，你可以检查四氢呋喃的质量和纯度，四氢呋喃易于产生过氧化物，四氢呋喃包含的一些东西是抑制过氧化物的产生，你可以从你溶剂瓶的标签上面得到信息，四氢呋喃也是塑料零件和从这些塑料中提起添加剂的优良溶剂，因此，任何与四氢呋喃接触的东西都是可疑的，过滤器，油管，密封件，套圈，等等

水也是可能的原因之一，大多数情况下，超纯水都是由Milli-Q?制水系统等的仪器制的，制水系统使用一段时间后需要更换相应的耗材。

另外一个来源是缓冲盐或者准备缓冲盐的过程中，在准备缓冲液的时候你用什么搅动你的烧杯？烧杯清洁过吗？你是用pH计测量pH吗？在使用之前你清洗过电极吗？

当你检查完流动相以及所能接触到的所有东西，但是发现问题依旧存在，我会再次认真的检查仪器细节，检查里面是不是有能和流动相发生反应的，特别是四氢呋喃？是不是仪器上面的小的细节都正确的清洗了呢？是不是管路里面长细菌了？我敢说我会把我的注意力放在溶剂，水，缓冲液的准备上面，并且仔细的检测。

听起来不错，但是这个的任务量也非常大，是不是有更简便的方法？

首先，我不明白为什么，其次，，你应该问自己一个问题，为什么你想要消除负峰，上面的描述感觉好像负峰并不会干扰分析，因此，你可能宣传这是一个生活常识，并且忽略它，当然如果你的实验室有严格的要求，那么这个你就需要仔细研判。

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