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峰过载(液相)

  • 遗忘曲线
    2021/09/20
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 当我增加样品量的时候,峰就变得拖尾和展宽,我样品的浓度相当低,因此,不会期望峰过载,如果你能讨论一下可能导致这样一个事件的现象,我会不胜感激的。

    柱的质量过载只是由于增加进样量而导致峰变形的现象之一。这优肯是流动相是过载的,如果样品没有在流动相中完全溶解,那就有可能发生这样的事情,然而,让我们首先讨论色谱柱质量过载。


    色谱柱的质量过载也可以快速的诊断出来,对于平常的分析,色谱柱的质量过载指的是柱体积的每平方毫米上面的进样量在0.1mg-1mg,如果你使用紫外检测器,你可以使用其他的规则,对于大多数具有强紫外吸收的分析物,当峰值高度达到约0.1AUFS时,质量过载就会开始了,当然,这些规则都是粗略的经验法则,但是如果你的进样量很少很少,那质量过载发生的概率就微乎其微


    确实,样品的进样量应该更少,但是,我不认为质量过载造成峰型差,还有其他原因导致吗?


    一个常见的问题是溶解样品的溶剂,如果溶解样品的溶剂的洗脱能力比流相大的很多,那么峰型差就会发生,这其中有几个原因,样品可能需要在固相提取过程得到,它需要比流动相更强的溶剂,在这种情况下,更换较弱的洗脱机稀释样品就可以解决这个问题,或者,可以将样品蒸发到干燥,然后在移动相或较弱的洗路液中重新稀释,溶解测试产生的样品也引起了类似的问题。样品中的酸可能会使流动相的缓冲区超载,并导致峰型差,这个可以通过调节样品的pH或者在流动相中使用更强的缓冲盐,为了制备更强的缓冲区,增加其浓度并将pH调整到接近缓冲区的pKa的值,这需要一点基本功底,但相对简单。在大多数检测中,样品中分析物的数量非常少,通常只是感兴趣的化合物加上内部标准。


    如果样品的pH值是峰畸变的原因,那么缓冲液浓度的简单增加通常是溶液的原因,即使色谱图相当稳定很拥挤。通常,即使缓冲液浓度发生显著变化,保留率的变化也很小。当然,你应该检查缓冲液开始沉淀的浓度。


    峰畸变问题的另一个原因是样品在流动相中的溶解度低。其效果类似于样品溶解在不同溶剂中的情况。毕竟,样品溶解在不同于流动相的溶剂中,以解决溶解度低的问题。幸运的是,这种情况是真正的问题是非常罕见的。在这种情况下,最好的方法可能是解决问题,这意味着可以确定样品浓度的浓度范围相当窄。或者,选择完全不同的色谱模式可以提供解决方案。


    问:这些问题似乎都不适用。剩下什么?


    答:我们尚未讨论的一个项目是简单的样本卷过载。如果样品溶解在流动相中,注入大量样品,则峰变宽。这种现象对早期洗脱峰的影响较大,对晚期洗脱峰的影响较小。我们可以用这个标准来区分这个问题和我们讨论过的其他问题。溶液相当简单:将样品溶解在比流动相弱的洗脱溶剂中。如果这是个问题,你可以很快检查。用流动相中较弱的洗脱液稀释样品2倍,然后注入2倍于样品体积的溶液。这将使样品集中在柱顶部,样品总量保持不变。如果峰值失真消失,简单的体积过载就是问题所在。只需在将来将样品溶解在洗脱强度较低的溶剂成分中,问题就会消失。仔细考虑样品溶剂对分析结果的影响可以解决许多问题。



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